以樹突狀細胞為基礎的前列腺癌免疫治療的研究.pdf

1、背景及目的： 前列腺癌是男性泌尿生殖系統中最為重要的腫瘤之一。在我國，隨著國民經濟的不斷發(fā)展、老齡人口逐年增加，前列腺癌的發(fā)病率呈顯著增長趨勢，有研究顯示國內部分地區(qū)的前列腺癌發(fā)病率達到7.7/10萬，位列全身腫瘤的第7位[1]。前列腺癌的治療方法主要包括外科治療、放療和激素治療，其中外科治療是目前認為可以治愈前列腺癌的方法，根治性手術要考慮腫瘤的臨床分期、預期壽命和健康狀況。放射治療對于局限性前列腺癌的療效與根治性手術相似。內

2、分泌治療可以有效的延緩前列腺癌的進展，但是經過中位時間14—30個月后，幾乎所有患者病變都將逐漸發(fā)展為激素非依賴性前列腺癌（androgen—independent prostate cancer，AIPC），在激素非依賴的早期，有些患者對二線治療仍有反應，但最終都將發(fā)展為激素難治性前列腺癌（hormone—refractory prostate cancer，HRPC）[2]。對于AIPC、HRPC、喪失根治性手術機會和轉移的患者目前

3、尚無有效的治療手段，因此如何改善這類前列腺癌患者的預后、延長患者的生存期一直是國內外學者努力探求的目標。 樹突狀細胞（dendritic cell，DC）是體內功能最強的抗原提呈細胞，DC是專職抗原呈遞細胞（antigen presenting cell；APC），其遞呈抗原，激發(fā)T細胞增殖的能力是其它抗原遞呈細胞的100—1000倍[3]，DC不僅可以極其高效的提取、處理、加工和提呈抗原，而且能直接激活初始型T細胞。研究證明，

4、DC可以啟動抗原特異性T細胞識別和殺傷腫瘤細胞。正是因為DC在免疫應答中的舉足輕重的地位，使其成為免疫學領域的研究熱點，尤其是DC瘤苗的研究和應用倍受關注。本實驗的目的就是研究通過將前列腺癌的RNA負載DC制備DC瘤苗，并通過多種分子生物學技術及免疫學技術研究DC瘤苗的分子生物學特性和抗腫瘤細胞功能。通過該實驗研究，可能為以DC為基礎的前列腺癌免疫治療提供一條新的治療策略，從而進一步應用于臨床。 材料與方法： 首先通過密

5、度分離法分離獲得健康志愿者外周血的單核細胞（peripheral blood monouclear cells，PBMC），用重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（rhGM—CSF）和重組人白介—4（rhIL—4）與PBMC共同培養(yǎng)產生DC細胞。提取前列腺癌PC—3細胞總RNA致敏DC細胞并用流式細胞儀檢測致敏后細胞及PBMC的表面標志物CD14、CD40、CD80、CD86的表達。致敏后的DC與淋巴細胞共同培養(yǎng)誘導產生特異性細胞毒性T淋巴

6、細胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL），以誘導產生的T淋巴細胞為效應細胞，以PC—3前列腺癌細胞為靶細胞，共同培養(yǎng)后用MTT細胞毒檢測試劑盒檢測特異性CTL對腫瘤細胞的殺傷率。最后用統計學軟件SPSS對結果進行分析。P值取0.05。 結果： 總RNA致敏后誘導后的DC細胞高表達CD40（63.28±3.74）、CD80（67.79±3.55）和CD86（77.24±3.06），較前CD40（16.1

7、3±1.00）、CD80（13.60±1.28）、CD86（15.76±1.43）相比顯著增高，低表達CD14（17.45±1.53），較前（42.04±2.89）顯著降低（P<0.05），有統計學意義。前列腺癌組殺傷率（55.27±9.76）與空白對照組殺傷率（36.75±7.06）之間的差異有統計學意義（p=0.009<0.05）。胃癌對照組殺傷率（36.75±7.06）與空白對照組殺傷率（35.66±7.85）之間差異無統計學意義