中分子量羥乙基淀粉對大鼠脊髓損傷后血脊髓屏障及疼痛行為學(xué)變化的影響.pdf

1、目的：
　　 脊髓損傷(Spinal cord injury，SCI)后血脊髓屏障遭到破壞，其與脊髓損傷后繼發(fā)性疼痛(Spinal injury-induced pain，SIP)有無相關(guān)性目前知之不多。近年來的研究表明，脊髓內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和炎癥因子在SIP的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。本研究通過建立脊髓損傷后疼痛模型，觀察大鼠疼痛行為學(xué)變化，檢測損傷段大鼠脊髓組織內(nèi)伊文氏藍(lán)含量，觀察血脊髓屏障通透性變化和相關(guān)炎癥因子(IL-1β

2、、IL-6、TNF-α)，以及小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和蛋白表達(dá)變化，從而觀察中分子量羥乙基淀粉(HES130/0.4)、低分子量羥乙基淀粉(HES40)及生理鹽水對脊髓損傷后大鼠血脊髓屏障及疼痛行為學(xué)變化的影響。并初步探討其可能的作用機(jī)制，為臨床上完善治療或預(yù)防脊髓損傷后繼發(fā)性疼痛探求一種新思路。
　　 方法：
　　 1、成年SD大鼠，雄性，體重250±10g，取72只采用隨機(jī)數(shù)字法分為生理鹽水組、HES40組、H

3、ES130/0.4組、假手術(shù)組，每組18只大鼠。其中假手術(shù)組只做相應(yīng)的椎板去除術(shù)，其余三組大鼠利用NYU大鼠脊髓撞擊儀Ⅰ型制備脊髓(T10)水平撞擊傷模型，術(shù)后相應(yīng)各組即刻經(jīng)尾靜脈分別給予生理鹽水、HES40、HES130/0.4，以后均每日給藥兩次。手術(shù)組大鼠術(shù)后行膀胱按摩人工排尿，每日2-3次，直至大鼠恢復(fù)自主排尿反射。
　　 2、各組大鼠分別在術(shù)前1d、術(shù)后10d、14d、20d、30d、60d測后足機(jī)械痛敏壓力閾值(pa

4、w withdraw pressure threshold，PWPT)和熱痛敏潛伏期(paw withdrawlatency，PWL)變化，同時(shí)觀察對比各組大鼠疼痛行為學(xué)的表現(xiàn)。
　　 3、各組大鼠術(shù)后3d，檢測損傷段脊髓組織內(nèi)伊文氏藍(lán)相對含量進(jìn)而觀察血脊髓屏障變化情況。
　　 4、術(shù)后10d，免疫熒光組織化學(xué)法和Western blot觀察小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞溶酶體膜蛋白和內(nèi)鈣結(jié)合蛋白標(biāo)記物ED1和Iba1活化及蛋白表

5、達(dá)情況。
　　 5、ELISA法測定大鼠損傷段脊髓組織內(nèi)IL-1β、IL-6及TNF-α的表達(dá)變化。
　　 6、采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、術(shù)后3d，HES130/0.4組、HES40組、生理鹽水組與假手術(shù)組相比，脊髓組織內(nèi)伊文氏藍(lán)相對含量為：生理鹽水組：(2.58±0.29)、HES40組：(2.38±0.47)、HES130/

6、0.4組：(1.38±0.34)。HES130/0.4組伊文氏藍(lán)相對含量分別較生理鹽水組和HES40組顯著降低(P<0.05)。
　　 2、術(shù)后10d、14d、20d、30d、60d時(shí)間點(diǎn)，HES130/0.4組、HES40組、生理鹽水組大鼠PWPT和PWL較術(shù)前均顯著降低(P<0.05)，HES130/0.4組術(shù)后所測各時(shí)間點(diǎn)PWPT和PWL較生理鹽水組和HES40組均明顯升高(P<0.05)。
　　 3、術(shù)后10d，

7、免疫熒光結(jié)果顯示：HES130/0.4組、HES40組、生理鹽水組Iba1和ED1表達(dá)均呈活化狀態(tài)，但HES130/0.4組活化的數(shù)量明顯低于生理鹽水組和HES40組。
　　 4、術(shù)后10d，各組大鼠Western blot檢測Iba1和ED1蛋白表達(dá)情況，Quantity One軟件進(jìn)行灰度值分析，HES130/0.4組、HES40組、生理鹽水組大鼠較假手術(shù)組均明顯升高(P<0.05)。Iba1相對灰度值為：生理鹽水組：(0.

8、36±0.034)、HES40組：(0.35±0，029)、HES130/0.4組：(0.27±0.047)、假手術(shù)組：(0.12±0.024)；ED1相對灰度值為：生理鹽水組：(0.54±0.044)、HES40組：(0.55±0.028)、HES130/0.4組：(0.38±0.054)、假手術(shù)組：(0.06±0.015)。HES130/0.4組Iba1和ED1相對灰度值較生理鹽水組和HES40組均明顯下降(P<0.05)。

9、　　 5、術(shù)后10d，ELISA檢測HES130/0.4組、HES40組、生理鹽水組大鼠損傷段脊髓組織內(nèi)IL-1β、IL-6、TNF-α與假手術(shù)組的相對表達(dá)量分別為：IL-1β相對表達(dá)量為：生理鹽水組：(1.46±0.10)、HES40組：(1.42±0.14)、HES130/0.4組：(1.18±0.11)；IL-6相對表達(dá)量為：生理鹽水組：(1.32±0.12)、HES40組：(1.33±0.08)、HES130/0.4組：(1.

10、12±0.09)；TNF-α相對表達(dá)量為：生理鹽水組：(1.41±0.10)、HES40組：(1.39±0.11)、HES130/0.4組：(1.19±0.12)。三種炎癥因子HES130/0.4組較生理鹽水組和HES40組均明顯下降(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、利用NYU大鼠脊髓撞擊儀所致疼痛模型具有較高的穩(wěn)定性、可操控性，同時(shí)其良好的可重復(fù)性、臨床相關(guān)性，可滿足脊髓損傷后疼痛研究的實(shí)驗(yàn)需要。