提高大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為胰島樣細(xì)胞能力的實驗研究.pdf

1、目的：（1）大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、提取和培養(yǎng)。（2）探討損傷胰腺提取液和細(xì)胞生長因子對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島樣細(xì)胞的影響。
　　方法：（1）無菌條件下通過手術(shù)獲取大鼠脂肪組織，用膠原酶消化法獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，并通過胰蛋白酶消化法傳代細(xì)胞以達(dá)到純化的目的。（2）按對照組、藥物誘導(dǎo)組、混合誘導(dǎo)組和損傷胰腺提取液組的順序進(jìn)行分組，各組加入不同的細(xì)胞誘導(dǎo)因子和損傷胰腺提取液對細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)11d，誘導(dǎo)完畢后，于倒置顯微鏡下觀察

2、細(xì)胞形態(tài)變化；用雙硫腙(STZ)染色鑒定胰島素陽性細(xì)胞；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)來比較高糖環(huán)境刺激前后各組胰島素分泌量的多少；通過免疫熒光染色和熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)來檢測相關(guān)基因的表達(dá)量。
　　結(jié)果：（1）獲取的大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長，原代細(xì)胞呈圓形；36-48h開始有梭形細(xì)胞貼壁或者成團(tuán)的細(xì)胞集落形成；7-8天左右，原來成團(tuán)聚集的細(xì)胞向外擴(kuò)散生長，細(xì)胞之間的間隙逐漸縮小并相互融合，呈現(xiàn)旋渦狀生長。

3、約10天左右，瓶底細(xì)胞達(dá)到80％-90%融合。經(jīng)過消化傳代，細(xì)胞的純度逐漸增高。（2）誘導(dǎo)組細(xì)胞形狀變?yōu)閳A形并聚集成團(tuán)，出現(xiàn)DTZ染色陽性細(xì)胞；在高糖環(huán)境作用下分泌胰島素且混合誘導(dǎo)組相比較于其余誘導(dǎo)組分泌量多；混合誘導(dǎo)組相關(guān)基因的表達(dá)量多于其余兩組。對照組未出現(xiàn)上述變化。
　　結(jié)論：（1）膠原酶消化法能夠分離出大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，通過胰蛋白酶消化法可以實現(xiàn)細(xì)胞的純化。（2）損傷胰腺提取液對大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島樣細(xì)胞具有