姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2中MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是世界上常見(jiàn)惡性腫瘤，占原發(fā)性性肝癌的90％以上。據(jù)2002年統(tǒng)計(jì)，全世界每年肝癌發(fā)病人數(shù)約為626000例，死亡598000例，其發(fā)病率在常見(jiàn)腫瘤中位列第6，而病死率則排第3位。我國(guó)肝細(xì)胞肝癌的發(fā)病率與死亡率高居世界第一位。我國(guó)每年新發(fā)肝癌人數(shù)約占全球半數(shù)以上，而死于肝癌人數(shù)約占全球肝癌死亡人數(shù)的50％-55％，肝癌死亡率在我國(guó)癌癥病死率中排第2位。肝癌早期臨床

2、癥狀不明顯，起病隱匿，但進(jìn)展迅速，確診時(shí)大多數(shù)患者已屬局部晚期或已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。肝細(xì)胞癌發(fā)生侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移嚴(yán)重影響了肝癌治療的預(yù)后。因此，急需一種有效的抗腫瘤藥物，來(lái)控制肝癌的侵襲及轉(zhuǎn)移。
　　腫瘤從原位癌到局部侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的演變過(guò)程中，最重要的條件是細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular Matrix，ECM)的降解，而ECM的降解需要多種蛋白水解酶類，其中基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases，M

3、MPs)是降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要作用酶。由于細(xì)胞外基質(zhì)的基本骨架是由Ⅳ型膠原組成，而明膠酶(MMP-2和MMP-9)是目前為止唯一可降解Ⅳ型膠原的一種蛋白水解酶，其通過(guò)破壞細(xì)胞外基質(zhì)的降解平衡，進(jìn)一步促進(jìn)癌細(xì)胞突破細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，發(fā)生局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，因此在腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中，明膠酶發(fā)揮著重要的作用。
　　姜黃素類藥物（姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素）是從姜黃屬植物根莖中提取的化合物。去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜

4、黃素為姜黃素的衍生物，三者具有相似的藥理作用，尤其在抗腫瘤方面。研究顯示，姜黃素及其衍生物作用于人纖維肉瘤HT1080細(xì)胞，可抑制MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)，且呈劑量依賴性。而姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2中MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的是否有同樣的抑制作用，目前研究較少。本實(shí)驗(yàn)初步探討姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2中MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的影響。
　

5、　方法:1常規(guī)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株HepG2;流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期的分布情況:收集不同濃度的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素（20、40μmol/L）分別處理24h后的肝癌細(xì)胞HepG2，在流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)細(xì)胞周期，應(yīng)用軟件進(jìn)行分析;
　　2 Western-Blot方法測(cè)定不同濃度的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素(20、40μmol/L)分別作用于HepG2細(xì)胞24h后，HepG2細(xì)胞中MMP-2、M

6、MP-9蛋白表達(dá)的變化，以及相同濃度姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素（40μmol/L）分別刺激肝癌細(xì)胞株HepG224小時(shí)，比較三種藥物對(duì)該細(xì)胞中MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)影響的作用強(qiáng)弱。
　　結(jié)果:1 FCM檢測(cè)結(jié)果顯示:不同濃度的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素(20、40μmol/L)處理肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞24小時(shí)后，與空白對(duì)照組相比，三種藥物均呈現(xiàn):隨藥物濃度的增加，HepG2細(xì)胞在G0/G1期分

7、布明顯增多(P＜0.05），S期與G2/M期細(xì)胞比例下降(P＜0.05），呈現(xiàn)G0/G1期阻滯;相同濃度的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素（40μmol/L）處理肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞24小時(shí)，三種藥物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞阻滯在G0/G1期能力的強(qiáng)弱順序無(wú)明顯差別(P＞0.05）。
　　2 Western-Blot方法檢測(cè)不同濃度的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素(20、40μmol/L)分別作用于HepG2

8、細(xì)胞24h后，與空白對(duì)照組相比，三種藥物各濃度組MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)均受到抑制。且呈濃度相關(guān)性(P＜0.05）。
　　3 Western-Blot方法檢測(cè)相同濃度姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素(40μmol/L)分別刺激肝癌細(xì)胞株HepG224小時(shí)，三種藥物抑制MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表達(dá)作用的強(qiáng)弱順序均為:雙去甲氧基姜黃素＞去甲氧基姜黃素＞姜黃素(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1姜黃素