非小細胞肺癌臨床病理與GNAS1基因多態(tài)性和EGFR基因突變的相關性分析.pdf

1、背景與目的：
　　肺癌發(fā)病快、轉(zhuǎn)移率高，是全世界惡性腫瘤患者最常見的死亡原因。據(jù)最新世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)顯示，肺癌的死亡率位居惡性腫瘤之首。近年來，由于環(huán)境等多重因素，女性肺癌的發(fā)病率也呈連年上升趨勢。肺癌已經(jīng)成為首位人類疾病殺手，造成了沉重的社會負擔。因此，攻克癌癥病因、找到解決方法成為人類的首要任務。普遍認為肺癌的發(fā)生、發(fā)展涉及到很多病理生理反應，是多因素、多機制參與的惡性腫痛。據(jù)流行病學研究發(fā)現(xiàn)，肺癌的發(fā)病因素主要與個人生活習慣

2、、周圍環(huán)境、藥物使用情況以及個體遺傳因素密切相關，但是到目前為止肺癌發(fā)病的確切機制依然不完全明了。由于肺部腫瘤中將近85％的是非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)，所以研究非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展機制將對肺癌的防治產(chǎn)生重大的影響。隨著生物醫(yī)學研究跨入分子時代，臨床腫瘤的治療也與時俱進的進入到了分子學時代。人類對于疾病的病因、發(fā)病機制、預后的研究和認識，也從傳統(tǒng)概念深入到分子生物層面。目前，以抑癌

3、基因、癌基因及相關基因研究為主的腫瘤分子研究成為熱點領域，一些生物標記分子已經(jīng)進入臨床應用。
　　單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）是一種最常見的人類可遺傳變異，是基因組內(nèi)特定單個核苷酸位置上堿基發(fā)生改變而造成堿基序列的改變，從而引起基因組DNA序列的多態(tài)性。SNPs與疾病的遺傳易感性、藥物敏感性治療及患者預后生存率的關系已由大量實驗證實。
　　鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白基因(gu

4、anine nucleotide-binding protein，α-stimulatingactivity polypeptide1，GNAS1)是編碼鳥苷酸結(jié)合蛋白(GTP-binding protein， G蛋白)的基因，該基因位于染色體20q13.2-13.3，包含13個外顯子和12個內(nèi)含子，是一個復雜位點編碼多種重疊轉(zhuǎn)錄本。鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白形式多樣，其介導的信號通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中細胞的瞬時反應和基因長久調(diào)節(jié)起重要作用，是

5、一種重要的信號分子，近年來研究進展迅速。多項研究表明，GNAS1基因第五外顯子T393C的SNPs與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、藥物敏感性治療及預后有關。
　　表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)在人類的細胞膜上廣泛分布，是一種蛋白酪氨酸激酶受體。EGFR與配體結(jié)合后，形成同源或異源二聚體，激活酪氨酸激酶，啟動下游信號轉(zhuǎn)導通路，促進上皮細胞的增殖和分化。目前研究發(fā)現(xiàn)，EGFR

6、基因突變與惡性腫瘤患者的臨床病理學特征、藥物敏感性及預后有關。
　　近年來關于鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白基因家族SNPs與多種腫瘤之間關系的研究增多，特別是關于GNAS1基因T393C與腫瘤臨床病理學特征、疾病的易感性和預后之間的關系。因此，在該實驗中對57例非小細胞肺癌患者樣本DNA中的GNAS1基因T393C單核苷酸多態(tài)性的基因型進行檢測;同時檢測DNA中的EGFR第18-21外顯子基因突變情況，從而探討GNAS1基因T393C單核苷酸多

7、態(tài)性、 EGFR基因突變率與非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展及臨床病理學特征之間的關系，旨在為非小細胞肺癌的基因診斷和治療提供新的理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　1.收集2012年12月至2013年3月鄭州大學第一附屬醫(yī)院非小細胞肺癌患者術后病理蠟塊組織共57例。
　　2.采用離心柱法提取57例非小細胞肺癌患者的蠟塊組織中基因組DNA。
　　3.采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度(polymerase chainreac

8、tion-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)對57例樣本DNA中的GNAS1基因T393C單核苷酸多態(tài)性基因型進行檢測。
　　4.用擴增阻滯突變系統(tǒng)（amplification refractory mutation system，ARMS）對57例樣本DNA中的EGFR第18-21外顯子基因突變進行檢測。
　　5.結(jié)果分析:對實驗數(shù)據(jù)進行記錄整理，用SPSS

9、17.0統(tǒng)計軟件對所以數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析比較，有序分類資料采用秩和檢驗，無序分類資料采用x2檢驗;二分類樣本用Wilcoxon檢驗，對于多分類資料，整體用Kruskal-wallis檢驗，但是要用Bonferroni法來進行資料中的兩兩比較;使用Logistic回歸模型估算優(yōu)勢比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(95％confidence interval，95％ CI)，同時相對風險度也以OR值及95％ CI來代表;檢

10、驗水準a=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.GNAS1基因T393C單核苷酸多態(tài)位點基因型T/T，T/C和C/C基因型頻率分別為38.60％(22/57)，49.12％(28/57)，和12.28％(7/57);T等位基因和C等位基因的頻率分別為63.16％和36.84％。
　　2.GNAS1基因T393C位點基因型分布頻率與非小細胞肺癌患者的一般情況（性別、年齡及吸煙史）、原發(fā)灶大小、TNM分期、分化程度及病理組織學分

11、型無關(P＞0.05）;基因型分布頻率與淋巴結(jié)是否遠處轉(zhuǎn)移有關(P＜0.05)。等位基因T、C分布頻率與非小細胞肺癌患者的一般情況、原發(fā)灶大小、TNM分期、分化程度以及組織學分型無關(P＞0.05)，等位基因分布頻率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P＜0.05)。
　　3.攜帶T/C、C/C基因型使非小細胞肺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風險增加（基因型C/C、T/C與T/T比較，OR值分別為8.500、6.120;用Bonferroni法對基因型兩兩比較

12、后結(jié)果顯示:基因型T/T與T/C比較，P＜0.05;基因型T/T與C/C比較，P＜0.05; T/C與C/C比較，P＞0.05。攜帶C等位基因使非小細胞肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風險增加（等位基因T與C比較，OR值=3.143; P＜0.05）。
　　4.57例非小細胞肺癌患者中EGFR突變頻率是61.54％(35/57)，在發(fā)生突變的基因中，15例為外顯子21發(fā)生突變，為L858R突變，另外20例為外顯子19發(fā)生的del缺失突變。

13、r>　　5.EGFR基因突變與非小細胞肺癌患者的年齡、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(P＞0.05)。
　　6.女性非小細胞肺癌患者EGFR基因的突變率71.43％(25/35)高于男性患者45.57％(10/22);腺癌的突變率67.74％(21/31)高于非腺癌53.85％(14/26);吸煙患者EGFR基因的突變率72.73％(16/22)高于非吸煙患者54.29％(19/35);腫瘤體積較小(＜3cm)、分化程度較好的非小細胞