UC-MSCs誘導(dǎo)表達(dá)IDO促燒傷大鼠修復(fù)的機(jī)制研究.pdf

1、目的:比較體外誘導(dǎo)表達(dá)吲哚2，3-雙加氧酶(indoleamine2，3-dioxygenase，IDO)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞）對T細(xì)胞增殖能力的影響，了解IDO高表達(dá)的UC-MSCs移植治療大鼠燒傷的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制、促燒傷修復(fù)效果，探討UC-MSCs在燒傷治療的臨床應(yīng)用前景。
　　方法:(1)體外實(shí)驗(yàn):建立穩(wěn)定的UC-MSCs系，用干擾素γ（Interferon-γ，IFN-γ）誘導(dǎo)UC-MSCs產(chǎn)生IDO，并分別用逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈?zhǔn)椒?/p>

2、應(yīng)(Reverse TranscriptionPolymerase Chain Reaction RT-PCR)和Western Blot檢測誘導(dǎo)后UC-MSCs的IDO信使核糖核酸（Messenger ribonucleic acid，mRNA）表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平;將T細(xì)胞分別與不同比例及不同組別的UC-MSCs共培養(yǎng)，檢測比較培養(yǎng)體系中T細(xì)胞的增殖能力。(2)動物實(shí)驗(yàn):取體重200±5g SD(sprague-dawley)雄性

3、大鼠294只隨機(jī)分為預(yù)實(shí)驗(yàn)組、鹽水對照組、空白對照組、MSCs組、Induced MSCs組、InducedMSCs+1-MT組。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)組燒傷后炎癥介質(zhì)變化曲線，確定UC-MSCs移植時間點(diǎn)。將鹽水對照組、空白對照組、MSCs組、Induced MSCs組、Induced MSCs+1-MT組共計240只大鼠制備燒傷模型，在燒傷24h后對鹽水對照組進(jìn)行皮下鹽水注射，MSCs組進(jìn)行UC-MSCs移植，Induced MSCs組移植經(jīng)I

4、FN-γ誘導(dǎo)表達(dá)IDO的UC-MSCs、Induced MSCs+1-MT組移植IFN-γ誘導(dǎo)表達(dá)IDO的UC-MSCs并添加IDO的拮抗劑1-MT，以上UC-MSCs的移植量均為2×106。并在燒傷后0d、1d、2d、3d、5d、7d、9d采集血樣，檢測其WBC、CRP及炎癥因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10表達(dá)變化，通過圖像分析軟件比較14d、21d、28d時各組創(chuàng)面愈合率。
　　結(jié)果:(1)通過RT-PCR和W

5、estern Blot檢測，結(jié)果顯示未誘導(dǎo)前UC-MSCs的IDO表達(dá)較弱，經(jīng)過IFN-γ誘導(dǎo)后，其IDO的表達(dá)增強(qiáng)，且隨著IFN-γ濃度的增加，UC-MSCs的IDO表達(dá)呈現(xiàn)出逐漸增強(qiáng)的趨勢。(2)共培養(yǎng)體系中，誘導(dǎo)產(chǎn)生IDO的UC-MSCs對T淋巴細(xì)胞的增殖與其他各組相比具有明顯的抑制作用(P＜0.01)，未經(jīng)誘導(dǎo)的UC-MSCs組對T細(xì)胞的增殖抑制作用強(qiáng)于IFN-γ誘導(dǎo)后添加1-MT拮抗劑的UC-MSCs移植組，相同條件下加入ID

6、O特異性的抑制劑1-MT的共培養(yǎng)體系中，UC-MSCs對T淋巴細(xì)胞的增殖抑制作用輕微。(3)在燒傷模型的炎癥因子檢測中，炎癥因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10在燒傷后七天內(nèi)出現(xiàn)不同程度的升高。InducedMSCs組和MSCs組較兩個對照組及誘導(dǎo)后MSCs+1-MT組的WBC、CRP和炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-10各項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度的降低，但I(xiàn)nduced MSCs組的炎癥指標(biāo)較MSCs組下降幅度更為顯著， I

7、FN-γ水平未見顯著差別。(4)創(chuàng)面愈合率。燒傷后14d，MSCs組、Induced MSCs組、Induced MSCs+1-MT組與兩組對照組相比，創(chuàng)面愈合率較高，但三組之間無統(tǒng)計學(xué)差異;燒傷后21d和28d，Induced MSCs組、MSCs組、Induced MSCs+1-MT組的創(chuàng)面愈合率顯著高于兩個對照組，且三組之間存在差異，即Induced MSCs組優(yōu)于MSCs組和Induced MSCs+1-MT組，而MSCs組優(yōu)于

8、Induced MSCs+1-MT組。
　　結(jié)論:經(jīng)IFN-γ誘導(dǎo)表達(dá)IDO的UC-MSCs對T淋巴細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用。通過燒傷后移植UC-MSCs可降低燒傷后炎癥相關(guān)指標(biāo)，而經(jīng)IFN-γ誘導(dǎo)后的UC-MSCs對炎癥免疫應(yīng)答水平的調(diào)節(jié)作用更為顯著，IDO是UC-MSCs發(fā)揮抑制炎癥作用的關(guān)鍵分子之一。在燒傷大鼠的組織修復(fù)過程中，UC-MSCs移植可促進(jìn)損傷部位血管形成、成纖維細(xì)胞的增殖以及后續(xù)的皮膚修復(fù)重建，促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合