bFGF基因轉(zhuǎn)染MSCs對COPD的修復(fù)作用及其機制研究.pdf

1、目的:研究外源性堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)對COPD造模大鼠的修復(fù)作用及其機制。
　　方法:全骨髓貼壁細胞培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)4-5周SD大鼠的BMSCs,并用CM-Dil做熒光標(biāo)記。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將bFGF基因轉(zhuǎn)染入BMSCs,用qRT-PCR及Western-blot測轉(zhuǎn)染后bFGF基因及其目的蛋白的表達量。煙熏及脂多糖(LPS)氣管滴入復(fù)合方法構(gòu)建COPD大鼠模型。本課題分為5個實驗組

2、,共50只大鼠,隨機平均分為正常對照組(NC組)、COPD對照組(PC組)、MSCs治療組(M組)、pcDNA3.1-MSCs治療組(P組)、bFGF-pcDNA3.1-MSCs治療組(B組)。NC組:尾靜脈注入3ml PBS液作陰性對照,PC組:造模后立即尾靜脈注入3ml PBS液作陽性對照,M組:造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代MSCs1×107/3ml PBS液,P組:造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代pcDNA3.1-MSCs1×

3、107/3ml PBS液,B組:造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代bFGF-pcDNA3.1-MSCs1×107/3ml PBS液。以上各組大鼠在給藥后30天統(tǒng)一采集動脈血行血氣分析檢測,行肺泡灌洗術(shù)收集肺泡灌洗液計數(shù)WBC及N％,并取大鼠肺組織制作冰凍切片觀察BMSCs定植情況、HE染色觀察其病理形態(tài)及測量MAN、MAA及MLI值。
　　結(jié)果:1、成功分離大鼠BMSCs,流式細胞表型檢測CD44、CD29陽性,CD34陰性,鑒定成

4、功;2、bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs后用qRT-PCR檢測其基因表達量,結(jié)果示轉(zhuǎn)染了bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒的BMSCs大量表達bFGF基因,較轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1空白質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的BMSCs明顯升高,差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義,說明bFGF基因成功轉(zhuǎn)染入BMSCs中并可大量表達其目的基因;3、bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs后用 Western-blot檢測其蛋白表達量,結(jié)果示轉(zhuǎn)染了bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒的BMSCs大量表達bFG

5、F目的蛋白,較轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1空白質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的BMSCs明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,說明bFGF基因成功轉(zhuǎn)染入BMSCs中并可大量表達其目的蛋白;4、標(biāo)記的BMSCs移植入大鼠體內(nèi)后28天肺組織病理可見紅色點狀的呈簇狀分布的熒光,說明BMSCs在大鼠肺組織內(nèi)成功定植;5、血氣分析值:PC組、M組、P組、B組均有輕度低氧血癥表現(xiàn),無二氧化碳潴留及酸中毒表現(xiàn),PC組、M組、P組、B組PO2、SaO2值均低于NC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義

6、,其中M組、P組、B組PO2值均高于PC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而這3組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但B組PO2值較M組、P組有升高趨勢;6、肺泡灌洗液WBC及N%計數(shù):NC組、M組、P組、B組的WBC及N%計數(shù)均明顯低于PC組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,而其之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,其中B組WBC及N%計數(shù)較M組、P組相比無減少趨勢,M組、P組、B組3個治療組WBC及N%計數(shù)均稍高于NC組;7、肺組織病理形態(tài)參數(shù)MAN、MAA:PC組、M組、P組、B組

7、MAN、MAA值均低于NC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,其中M組、P組、B組MAN、MAA值均高于PC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而這3組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但B組MAN、MAA值較M組、P組有升高趨勢;8、肺組織病理形態(tài)參數(shù)MLI值:PC組、M組、P組、B組均高于NC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,其中M組、P組、B組MLI值均低于PC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而這3組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,B組MLI值較M組、P組無下降趨勢。
　　結(jié)論:1.外源性bFG

8、F基因成功轉(zhuǎn)染入大鼠BMSCs并可大量表達其目的基因及目的蛋白;2.外源性BMSCs經(jīng)尾靜脈注射后可以到達COPD造模大鼠的肺組織并可成功實現(xiàn)在局部定植;3.外源性bFGF-pcDNA3.1-BMSCs移植治療對COPD造模大鼠的修復(fù)效果較明確,較單純造模組COPD程度有明顯改善,較單純BMSCs移植治療組有增加趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義,因此尚不能推斷bFGF有明顯的修復(fù)COPD作用;4.單純BMSCs移植治療對COPD造模大鼠的修復(fù)效