轉(zhuǎn)染Survinvin基因的MSCs對小鼠腎臟缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：探討轉(zhuǎn)染survinvin基因后的骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)在腎臟缺血微環(huán)境中的存活能力以及對小鼠腎臟缺血再灌注損傷的修復(fù)作用能力和機制。
　　方法：復(fù)蘇、擴增培養(yǎng)已完成空病毒、Survinvin基因轉(zhuǎn)染、鑒定、EGFP標(biāo)記工作的MSCs，擴增培養(yǎng)，觀察綠色熒光表達情況備用，48只SPF級健康雄性C57BL/6J分為正常對照組12只、IR組(小鼠雙側(cè)腎動脈夾閉40min后恢復(fù)血供)12只、空病毒轉(zhuǎn)染移植組(MSCs組，小鼠

2、雙側(cè)腎動脈夾閉40min后恢復(fù)血供24后經(jīng)尾靜脈注射200微升1×106個細胞)12只、survinvin基因轉(zhuǎn)染移植組(SVV/MSCs組，小鼠雙側(cè)腎動脈夾閉40min后恢復(fù)血供24小時后經(jīng)尾靜脈注射200微升1×106個survinvin基因轉(zhuǎn)染細胞124只，選取細胞移植后1d、3d、7d、14d不同時間點采集血清行肌酐尿素氮檢測，切取小鼠腎臟行石蠟切片觀察MSCs存活數(shù)目并定量分析，HE染色觀察腎組織病理變化及腎小管損害程度評分，

3、ELISA檢測腎臟勻漿中細胞因子HGF、bFGF、IL-10的表達情況。
　　結(jié)果：復(fù)蘇、擴增培養(yǎng)出的：MSCs增值活力旺盛，熒光狀態(tài)良好；移植細胞1天后MSCs組與SVV/MSCs組肌酐尿素氮水平明顯低于IR對照組(p<0.01或p<0.05)。腎臟HE染色病理損害評分，干細胞移植組損傷較輕，SVV/MSCs明顯低于其他兩組(p<0.01或p<0.05)。第3天、14天存活于腎組織的移植細胞數(shù)目SVV/MSCs組遠高于MSCs組

4、，表達EGFP的MSCs主要分布于腎小球周圍、小血管內(nèi)壁、腎小管與腎小管之間的間質(zhì)，而腎小管內(nèi)壁幾乎見不到表達EGFP的MSCs。在腎臟缺血損傷后保護性因子HGF、bFGF、IL-10水平升高SVV/MSCs也比IR組、MSCs組明顯的多(P<0.01或p<0.05)，并且在第14天時與正常對照組已無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：轉(zhuǎn)染Survinivin基因可以增加MSCs在缺血腎臟中的生存能力，MSCs主要通過其強大的旁分泌作用進一步