纖維細(xì)胞在大鼠多柔比星慢性腎損害模型腎纖維化過程中的作用以及雷帕霉素對(duì)其的影響.pdf

1、背景與目的：腎纖維化是各種病因所致的慢性腎損傷走向終末期腎臟病(End stage renal disease，ESRD)的共同途徑，以腎小球硬化及腎小管間質(zhì)纖維化為主要病理特征，目前研究證實(shí)其發(fā)生和發(fā)展與成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞關(guān)系密切，而作為這兩種細(xì)胞的循環(huán)前體細(xì)胞的纖維細(xì)胞(fibrocyte)近來成為研究焦點(diǎn)。阻斷纖維細(xì)胞趨化、遷移及轉(zhuǎn)分化可能能有效地延緩腎纖維化進(jìn)展。雷帕霉素（rapamycin，RAPA）是一種新型、強(qiáng)效免疫

2、抑制劑，具有較強(qiáng)的抗炎、抗病毒、抗細(xì)胞增殖以及血管保護(hù)作用。研究表明RAPA在多個(gè)動(dòng)物腎病模型中具有明顯的抗腎纖維化作用。本實(shí)驗(yàn)以大鼠多柔比星腎損害模型為研究對(duì)象，觀察纖維細(xì)胞的組織定位以及CCR7、CD45的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)而探討纖維細(xì)胞在腎纖維化的發(fā)生發(fā)展中可能的作用，同時(shí)觀察RAPA干預(yù)治療對(duì)纖維細(xì)胞相關(guān)因子的影響，來進(jìn)一步探討其抗腎纖維化作用的可能機(jī)制。
　　 方法：通過兩次給予大鼠尾靜脈注射多柔比星制備多柔比星腎損害大鼠模

3、型。雄性SD 大鼠62只隨機(jī)分為：正常對(duì)照組(A組，n=20)、模型組(B組,n=32)、RAPA治療組(C組,n=10)。實(shí)驗(yàn)開始第1、2周第1天，B、C組分別重復(fù)給予多柔比星（4 mg/kg）尾靜脈注射，對(duì)照組給予等量生理鹽水，自首次注射多柔比星之日起，于第2周末給予C組大鼠RAPA1.5mg/(kg·d)灌胃；A、B組同時(shí)給予等量溶媒。分別于首次注射多柔比星后的第4、7、10、13周末收集A、B組的血、尿及腎組織標(biāo)本，第7周末收集

4、C組的血、尿及腎組織標(biāo)本。全自動(dòng)生化儀測定血清甘油三脂、總膽固醇和白蛋白；BCA法檢測24 h尿蛋白排泄率；Masson染色，光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)變化，并使用腎小球硬化指數(shù)（glomerulosclerosis index，GSI）和腎小管間質(zhì)損傷指數(shù)（tubulointerstitial index,TII）評(píng)估腎臟損害程度；免疫組化觀察纖維細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行組織定位，同時(shí)檢測CD45、CCR7蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：

5、　　 1.各組大鼠血甘油三酯、總膽固醇及血清白蛋白水平變化 B組與A組相比第7周末，血甘油三酯水平升高(2.57±1.19 vs 0.76±0.11,P＜0.01）、血總膽固醇水平升高（6.79±1.47 vs 1.29±0.27,P＜0.01）顯著升高，血清白蛋白水平明顯降低（21.41±2.11vs 34.64±0.96，P＜0.01）。
　　 2.各組大鼠24 h尿蛋白排泄率的變化 B組與A組相比第7周末，24 h尿蛋白

6、排出率明顯增加（568±102 vs 21±6,P＜0.01），且隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間呈逐漸上升趨勢；C組低于同時(shí)相B組(P＜0.01)。
　　 3.各組大鼠腎臟病理形態(tài)學(xué)改變光鏡下觀察，B組腎小球系膜基質(zhì)明顯增多，腎小管多灶性萎縮和擴(kuò)張，管腔內(nèi)可見蛋白管型，并隨時(shí)間延長逐漸加重。GSI及TII隨時(shí)間延長逐漸升高（P＜0.05）。與B組相比較，C組腎小球的硬化和小管間質(zhì)纖維化均明顯減輕(P＜0.01）。
　　 4.纖維細(xì)胞的觀察

7、B組第7周末大鼠腎組織的連續(xù)切片上檢測到腎間質(zhì)中出現(xiàn)CD45、Ⅰ型膠原雙陽性細(xì)胞，呈圓形、橢圓形或不規(guī)則形態(tài)，多分布于腎皮質(zhì)和皮髓交界區(qū)的血管周圍，腎小球周圍和腎小管間質(zhì)中也有少量出現(xiàn)。
　　 5.各組大鼠CD45蛋白表達(dá)的變化免疫組化觀察到，B組腎間質(zhì)中CD45陽性細(xì)胞第4周末出現(xiàn)，第7周末數(shù)量達(dá)到頂點(diǎn)，后逐漸減少（P<0.01）。與B組相比，C組中相同時(shí)相CD45陽性細(xì)胞數(shù)量顯著降低（P＜0.01）。
　　 6.各組

8、大鼠CCR7蛋白表達(dá)的變化免疫組化觀察到，B組腎間質(zhì)中CCR7陽性細(xì)胞在第4周末出現(xiàn)，在第7周數(shù)量達(dá)到頂點(diǎn)，后逐漸減少（P<0.01）。與B組相比，C組中相同時(shí)相CCR7陽性細(xì)胞數(shù)量顯著降低（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：纖維細(xì)胞可能參與腎纖維化過程，早中期發(fā)揮作用，其由外周血遷移到組織可能與CCL21/CCR7信號(hào)傳遞通路有關(guān)。RAPA在大鼠慢性腎纖維化進(jìn)展中具有一定的腎保護(hù)作用，可能與降低CCR7蛋白的表達(dá)來抑制循環(huán)中纖維細(xì)