鹽酸莫西沙星在畢格犬體內(nèi)的藥代動力學(xué).pdf

1、目的：建立畢格犬血漿中鹽酸莫西沙星的含量測定方法；研究畢格犬口服鹽酸莫西沙星片及靜脈滴注鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液后體內(nèi)藥代動力學(xué)規(guī)律。
　　 方法：（1）血藥濃度測定方法：采用IR-HPLC法測定血漿中鹽酸莫西沙星的含量；色譜條件的優(yōu)選：對檢測波長、流動相的組成、配比，流速及柱溫等因素進(jìn)行分析，確定最佳色譜條件；選擇最合適內(nèi)標(biāo)物質(zhì)。（2）血漿樣品處理方法：取血漿1.0ml，加入適量內(nèi)標(biāo)，使用有機(jī)提取液[三氯甲烷：異丙醇=19：1

2、（v：v）]進(jìn)行液-液萃取，渦旋2 min，10900 rpm低溫離心10 min，吸取有機(jī)層，氮?dú)饬飨麓蹈?，殘?jiān)昧鲃酉嗳芙夂螅⑷敫咝б合嗌V儀，以內(nèi)標(biāo)法測定含量。（3）最低檢測限：配制不同濃度的鹽酸莫西沙星溶液，取20μl注入高效液相色譜儀，以信噪比S/N≥3時的鹽酸莫西沙星含量為最低檢測限。（4）線性及線性范圍：取空白血漿，加入系列濃度的鹽酸莫西沙星溶液及內(nèi)標(biāo)溶液，處理后注入高效液相色譜儀，以鹽酸莫西沙星含量為橫坐標(biāo)，鹽酸莫西沙

3、星與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。（5）鹽酸莫西沙星提取回收率：含低、中、高三種濃度的鹽酸莫西沙星模擬血漿樣品各5份，按血漿樣品處理方法處理后注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算與等量鹽酸莫西沙星溶液注入高效液相色譜儀后所得峰面積的比值。（6）內(nèi)標(biāo)提取回收率：取空白血漿5份，各加入適量內(nèi)標(biāo)，按血漿樣品處理方法處理，注入高效液相色譜儀并記錄峰面積，計(jì)算與等量內(nèi)標(biāo)溶液注入高效液相色譜儀后所得峰面積的比值。（7）方

4、法回收率：含低、中、高三種濃度的鹽酸莫西沙星模擬血漿樣品各5份，加適量內(nèi)標(biāo)液后按血漿樣品處理方法處理，注入高效液相色譜儀，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算血漿藥物濃度，計(jì)算與理論濃度的比值。（8）精密度：低、中、高三種濃度的模擬血漿樣品各5份，于一日內(nèi)不同時間處理并測定，計(jì)算日內(nèi)精密度。低、中、高三種濃度的模擬血漿樣品每天5份，按血漿樣品處理方法處理，連續(xù)制備并測定5天，計(jì)算日間精密度。（9）處理血漿樣品穩(wěn)定性：模擬血漿樣品9份，按血漿樣品處理方法處

5、理后-40℃避光、保存，分別于0，2，4，6，8 h和1，3，5，7 d測定，考察處理血漿樣品穩(wěn)定性。（10）反復(fù)凍融穩(wěn)定性：取空白血漿6份，分別加入鹽酸莫西沙星溶液及內(nèi)標(biāo)溶液，3份即刻處理并測定，另外3份反復(fù)冷凍、自然解凍三次后處理并測定，比較兩組差異。（11）血漿樣品保存穩(wěn)定性：取空白血漿6份，分別加入鹽酸莫西沙星溶液及內(nèi)標(biāo)溶液，其中3份即刻處理并測定，其余3份于-40℃避光保存13天后處理并測定，比較兩組差異。（12）藥代動力學(xué)：

6、健康、成年畢格犬6只，雌雄各半，體重10±0.4kg。隨機(jī)分為兩組（A、B）。A組按40 mg·kg-1的劑量口服鹽酸莫西沙星片，給藥完畢開始計(jì)時。于給藥后0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，4，6，9，12，24，36，48 h后肢靜脈取血2 ml，置肝素鈉抗凝的離心管中，3000 rpm低溫離心5 min，分取上層血漿，－40℃避光保存。B組按40 mg·kg-1的劑量靜脈滴注鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液，滴注時間為60 min

7、，給藥完畢開始計(jì)時。于給藥后0，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，4，6，9，12，24，36，48 h后肢靜脈取血2 ml，置肝素鈉抗凝的離心管中，3000 rpm低溫離心5 min，分取上層血漿，－40℃避光保存。兩周后A組靜脈滴注鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液，B組口服鹽酸莫西沙星片，處理同上。（13）血漿樣品處理測定：上述畢格犬血漿按血漿樣品處理方法處理后，注入高效液相色譜儀，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算血漿藥物濃度，血樣測定過程中穿

8、插測定質(zhì)控樣品。（14）藥代動力學(xué)參數(shù)的獲得：分別取各犬口服、靜脈滴注鹽酸莫西沙星后各時間點(diǎn)血漿藥物濃度值（n=6），采用DAS2.0軟件進(jìn)行自動擬合處理，利用“藥物代謝動力學(xué)智能分析計(jì)算程序”判斷房室模型及權(quán)重。（15）生物利用度：各犬的口服AUC與靜脈滴注AUC比值分別為各犬的生物利用度，取6只犬的生物利用度平均值得鹽酸莫西沙星的相對生物利用度。
　　 結(jié)果：（1）色譜條件：Waters高效液相色譜儀，515泵，486紫外檢

9、測器，Empower Application操作平臺；色譜柱：依利特C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（0.05 mol·L-1磷酸鹽緩沖液含0.01 mol·L-1四丁基硫酸氫銨，pH=3.8）=15：85；檢測波長：295nm；柱溫：25℃；流速：1.0 ml·min-1；進(jìn)樣量：20μl。（2）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)選用鹽酸環(huán)丙沙星。（3）系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：上述色譜條件下，鹽酸莫西沙星與鹽酸環(huán)丙沙星分離

10、良好，互不干擾，血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)以及其他雜質(zhì)均不干擾測定。鹽酸莫西沙星與鹽酸環(huán)丙沙星峰形良好，保留時間分別為9.3 min和4.8 min。（4）最低檢測限：0.04μg·ml-1。（5）線性及線性范圍：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)回歸處理后得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=0.7315X-0.0791，相關(guān)系數(shù)為r=0.9999（n=9），在0.1～25.6μg·ml-1范圍內(nèi)，血漿藥物濃度與峰面積比值線性關(guān)系良好。（6）鹽酸莫西沙星提取回收率：低、中、高三種濃度的鹽

11、酸莫西沙星模擬血漿樣品平均提取回收率分別為91.0％，81.4％和85.6％（n=5），其RSD值分別為8.6％，6.1％和7.2％。（7）鹽酸環(huán)丙沙星平均提取回收率為68.7％（n=5），其RSD值為3.1％。（8）方法回收率：低、中、高三種濃度的鹽酸莫西沙星模擬血漿樣品平均方法回收率分別為102％，96.8％和96.4％（n=5），其RSD值分別為4.2％，3.3％和3.3％。（9）精密度：低、中、高三種濃度模擬血漿樣品的日內(nèi)精密度

12、分別為4.2％，3.3％和3.2％（n=5）；日間精密度分別為3.3％，1.8％和2.4％（n=5）。（10）處理血漿樣品穩(wěn)定性：模擬血漿樣品按血漿樣品處理方法處理后-40℃避光放置，0，2，4，6，8 h和1，3，5，7 d的變異為4.9％。（11）反復(fù)凍融穩(wěn)定性：模擬血漿樣品即刻處理并測定與反復(fù)凍融三次后處理并測定，血漿藥物濃度值分別為1.57μg·ml-1和1.56μg·ml-1（n=3），RSD值分別為3.2％和2.9％，說明反

13、復(fù)凍融3次對血漿樣品穩(wěn)定性無影響。（12）血漿樣品保存穩(wěn)定性：第1日和第13日測得血漿藥物濃度值分別為1.57μg·ml-1和1.59μg·ml-1，RSD值分別為3.2％和3.2％（n=3）。（13）畢格犬口服鹽酸莫西沙星片后藥代動力學(xué)：畢格犬口服鹽酸莫西沙星片后藥代動力學(xué)行為符合二室開放模型，t1/2α為3.64 h，t1/2β為13.49 h，tmax為3.33 h，Cmax為7.35μg·ml-1，AUC為111.80μg·ml

14、-1·h。（14）畢格犬靜脈滴注鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液后藥代動力學(xué)：畢格犬靜脈滴注鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液后藥代動力學(xué)行為符合二室開放模型，t1/2α為5.26 h，t1/2β為7.82 h，Cmax為13.70μg·ml-1，AUC為117.20μg·ml-1·h。（15）鹽酸莫西沙星的相對生物利用度為95.4％。
　　 結(jié)論：本文建立了畢格犬血漿中鹽酸莫西沙星的含量測定方法，該方法操作簡便，分離度好，其準(zhǔn)確度、精密度、線性