人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植小鼠曲細(xì)精管的免疫反應(yīng)研究.pdf

1、【背景與目的】：男性不育癥是世界性的醫(yī)學(xué)難題,近年來(lái)，間充質(zhì)干細(xì)胞移植被應(yīng)用于男性生精功能障礙不育癥的治療中并取得一定的研究成果。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells，HuMSCs）因其具有高度的自我增值和多向分化潛能以及低免疫原性和獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)功能而逐漸成為新的間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源。前期研究表明HuMSCs移植到不育小鼠體內(nèi)后能夠遷移和存活至少4個(gè)月，并且能夠促進(jìn)其生

2、精功能的恢復(fù)，但人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植睪丸后是否引發(fā)免疫排斥尚存在爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)旨通過(guò)曲細(xì)精管顯微注射法，初步研究HuMSCs移植小鼠睪丸曲細(xì)精管后的免疫反應(yīng)情況，為今后HuMSCs應(yīng)用于臨床治療提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　【材料與方法】：（1）采用組織塊貼壁法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增HuMSCs，取第3代生長(zhǎng)良好的 HuMSCs以BrdU進(jìn)行標(biāo)記；（2）KM雄性小鼠隨機(jī)分為 HuMSCs移植組（DH：HuMSCs+含血清培養(yǎng)基）、含血清

3、培養(yǎng)基組（DM：含血清培養(yǎng)基）、293T移植組(DT：293T+含血清培養(yǎng)基)、正常對(duì)照組（NC:無(wú)處理組）；（3）通過(guò)顯微注射法將HuMSCs移植到小鼠睪丸曲細(xì)精管，移植后常規(guī)飼養(yǎng)；（4）觀察HuMSCs在曲細(xì)精管的存活、移行、分布情況；（5）于移植第2周、第3周解剖各組小鼠睪丸，通過(guò)組織病理切片觀察小鼠睪丸形態(tài)變化；（6）免疫組化法檢測(cè)睪丸巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況；（7）qRT-PCR及ELISA檢測(cè)睪丸炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF

4、-α、MCP-1、IFN-α、IFN-β的表達(dá)水平，了解各組免疫反應(yīng)情況。
　　【結(jié)果】：（1）通過(guò)顯微注射法成功將細(xì)胞移植到小鼠睪丸曲細(xì)精管，移植1周后HuMSCs主要存在于睪丸曲細(xì)精管的官腔內(nèi)，且有逐漸向基底膜移行的局勢(shì)，3周后即可觀察到細(xì)胞分布在生精上皮近基底膜處；（2）移植后DH、DT、DM組均出現(xiàn)局部免疫炎癥反應(yīng)，其中DT、DM組睪丸形態(tài)明顯改變，表現(xiàn)為生精上皮損傷，生精細(xì)胞脫落，部分表現(xiàn)為“空泡樣”改變，間質(zhì)增生，間質(zhì)

5、中可見(jiàn)到明顯巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，而DH組免疫反應(yīng)輕微，表現(xiàn)為生精上皮變薄，間質(zhì)輕度水腫，巨噬細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯增加；（3）移植第2周DH組炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1 mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯上調(diào)，而DT、DM組炎癥因子表達(dá)水平明顯升高，與 DH組有顯著性差異（P<0.05）；（4）ELISA結(jié)果顯示移植第2周DH組睪丸炎癥因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、IFN-α、IFN-β）表達(dá)量較正常對(duì)照組輕度增加

6、，而DT、DM組炎癥因子表達(dá)量則明顯增加（p<0.05）。
　　【結(jié)論】：（1）HuMSCs移植小鼠曲細(xì)精管后能夠存活并發(fā)生遷移，3周后分布在生精上皮近基底膜處；（2）DH組（HuMSCs+含血清培養(yǎng)基組）移植小鼠曲細(xì)精管后僅引起較微弱的免疫炎癥反應(yīng)，而 DT組(293T+含血清培養(yǎng)基組)免疫炎癥反應(yīng)較強(qiáng)，證實(shí) HuMSCs具有低免疫原性的特點(diǎn)；（3）DM組表現(xiàn)為強(qiáng)烈的免疫炎癥反應(yīng)，而DH組免疫反應(yīng)輕微，提示HuMSCs對(duì)含血清培