人臍帶間充質(zhì)干細胞靜脈輸注小鼠的安全性

1、人臍帶間充質(zhì)干細胞靜脈輸注小鼠的安全性人臍帶間充質(zhì)干細胞靜脈輸注小鼠的安全性何君12，李洋12，陳威12，郝好杰3，李名爍12，韓瑞紅12，武鑫12，盧星辰12，金翠英12，郭珣12，易輝12，李曉岑12，趙穎12，武巖12，徐玉環(huán)121.中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所，衛(wèi)生部人類疾病比較醫(yī)學重點實驗室，北京，1000212.中國醫(yī)學科學院糖尿病研究中心，北京，1000053.解放軍總醫(yī)院生命科學院基礎(chǔ)醫(yī)學所，北京，100853【摘要

2、摘要】目的目的探討C57BL6J小鼠重復(fù)多次尾靜脈輸注人臍帶間充質(zhì)干細胞后的免疫反應(yīng)和毒性。方法方法將SPF級別的32只C57BL6J小鼠隨機分為陰性對照組、細胞移植組，每組16只，雌雄各半，細胞移植組小鼠尾靜脈注射分離培養(yǎng)的第5代人臍帶間充質(zhì)干細胞，一次5106只，每周注射一次，連續(xù)注射4周；陰性對照組每次注射相同容積的PBS。注射后后觀察小鼠的一般癥狀，末次注射后1周、4周進行血細胞計數(shù)、血生化、免疫反應(yīng)指標、臟器質(zhì)量測定和組織病理

3、學檢查。結(jié)果結(jié)果細胞移植組小鼠血細胞計數(shù)、血生化、臟器重量和臟器系數(shù)與對照組無顯著性差異（P0.05），臟器組織病理學在光鏡下檢查結(jié)果與對照組無形態(tài)學差別，以及免疫結(jié)果測定（T細胞亞群CD3、CD4、CD8及CD4CD8）與對照組無顯著性差異(P0.05)，較對照組有顯著性差異（P?0.01）。結(jié)論結(jié)論人臍帶間充質(zhì)干細胞重復(fù)多次尾靜脈輸注C57BL6J小鼠是安全可行的，對受者無明顯免疫反應(yīng)和毒副作用?！娟P(guān)鍵詞關(guān)鍵詞】人臍帶間充質(zhì)干細胞；

4、靜脈輸注；重復(fù)多次【中圖分類號中圖分類號】R332AsafetystudyofintravenousinjectionofhumanumbilicalcdmesenchymalstemcellsinmiceHEJun12LIYang12CHENWei12HAOHaojie3LIMingshuo12HANRuihong12WUXin12LUXingchen12JINCuiying12GUOXun12YIHui12LIXiaocen12ZH

5、AOYing12WUYan12XUYuhuan121.InstituteofLabatyAnimalScience，ChineseAcademyofMedicalScience，Beijing100021，China2.Diabetesresearchcenter，ChineseAcademyofMedicalScience，Beijing100005，China3.InstituteofBasicMedicineScienceColl

6、egeofLifeScienceChinesePLAGeneralHospital，Beijing100853，China[Abstract]Objective:TostudythetoxicityofintravenousinjectionofhumanumbilicalcdmesenchymalstemcellsinC57BL6Jmicewithrepeatedadministrations.Methods:32SPF實驗動物提供初

7、步的實驗依據(jù)。1材料和方法材料和方法1.1主要試劑及儀器主要試劑及儀器PEFITC標記的大鼠抗小鼠CD4、CD8單抗，以及Percp標記的倉鼠抗小鼠CD3單抗均購自BD公司；抗小鼠CD19單抗購自eBioscience公司；抗小鼠IgG試劑盒（超敏二步法免疫組化檢測試劑）購自美國GBI公司。FACSCalibur流式細胞儀(美國BD)、7100全自動生化分析儀（日本日立）、PentraDX120全自動血液分析儀（法國ABX）、OPTIP

8、HOT2顯微鏡（日本尼康）。1.2動物來源及飼養(yǎng)動物來源及飼養(yǎng)5～7周齡SPFC57BL6J小鼠購自北京華阜康生物科技股份有限公司【SXK（京）20090004】，飼養(yǎng)于中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所新藥安全評價研究中心嚙齒類動物屏障設(shè)施【SYXK（京）20080012】，飼料經(jīng)60Co照射，飲用水及墊料均經(jīng)高壓消毒無菌處理，對小鼠的實驗操作均于無菌超凈臺中進行。1.3實驗材料來源實驗材料來源人臍帶間充質(zhì)干細胞由解放軍總醫(yī)院生命科學院

9、基礎(chǔ)醫(yī)學所培養(yǎng)和制備成細胞懸液，使用前均經(jīng)流式細胞儀檢測，細胞表面抗原符合間充質(zhì)干細胞的表型特征：CD34、CD45、CD73、HLADR、CD90、CD105。具體制備及表型檢測方法見該單位發(fā)表的文章[15]。1.4動物分組及干細胞輸注動物分組及干細胞輸注C57BL6J小鼠隨機分為細胞移植組、陰性對照組，每組16只，雌雄各半。收集培養(yǎng)的第5代人臍帶間充質(zhì)干細胞，采用PBS調(diào)整細胞濃度為2.51010L，細胞移植組每只小鼠尾靜脈注射0.

10、2ml次（即5106細胞只次），每周注射一次，連續(xù)注射4周；陰性對照組小鼠每只尾靜脈注射0.2mLPBS。1.5檢測指標和方法檢測指標和方法實驗期間每天觀察一般癥狀；每周測定1次體重、攝食量。在末次輸注后1周、4周分別將兩組的一半小鼠禁食16h，從眼內(nèi)眥靜脈叢采集EDTA抗凝血進行血細胞計數(shù)和外周血T淋巴細胞亞群檢測；采集血清進行肝腎功能指標測定；對動物實施安樂死后，采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、胸腺、胰腺等進行臟器稱重（成對臟