膜聯(lián)蛋白A家庭與子癇前期.pdf

1、子癇前期(preeclampsia,PE)是妊娠期特有的疾病,是妊娠期高血壓疾病最常見(jiàn)的類型。流行病學(xué)調(diào)查顯示其發(fā)病率在我國(guó)約為9.4％-10.4％,國(guó)外報(bào)道其發(fā)病率為7％-12％。盡管圍產(chǎn)保健技術(shù)不斷進(jìn)步,該病仍嚴(yán)重影響母兒健康,是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍生兒病率及死亡率增加的主要原因之一。盡管國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其病因及發(fā)病機(jī)制做了大量的研究,目前子癇前期的發(fā)病機(jī)制不明確,尚未發(fā)現(xiàn)明確單一致病因素,系多因素綜合作用所致。膜聯(lián)蛋白(annexins)是

2、一種非常古老而又廣泛存在的蛋白,是一種以鈣離子依賴性方式與酸性磷脂結(jié)合的蛋白質(zhì)。大量的研究顯示,膜聯(lián)蛋白在胞吞、胞吐作用、細(xì)胞間以及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的相互作用、離子通道的形成等多種生理過(guò)程中起作用。研究發(fā)現(xiàn),某些疾病的發(fā)生與膜聯(lián)蛋白家族在細(xì)胞中的表達(dá)密切相關(guān)。在annexin家族中,annexin A2和annexinA5與凝血-纖溶密切相關(guān)。長(zhǎng)期以來(lái),研究發(fā)現(xiàn)annexin A2和annexin A5與不良妊娠結(jié)局如復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、抗磷

3、脂綜合癥的胎盤變化密切相關(guān),但其與子癇前期的關(guān)系尚缺乏深入研究。
　　 第一部分缺氧條件下滋養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)及胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡和病理檢測(cè)
　　 目的:研究體內(nèi)外缺氧環(huán)境對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞在生長(zhǎng)、凋亡的影響及對(duì)胎盤的影響。
　　 方法:采用缺氧培養(yǎng)技術(shù)檢測(cè)體外缺氧情況下滋養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)體內(nèi)缺氧情況下(子癇前期患者體內(nèi)的缺氧狀態(tài))滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡。同時(shí)通過(guò)HE染色檢測(cè)子癇前期患者胎盤組織的病理變化。
　　

4、 結(jié)果:
　　 1 體外滋養(yǎng)細(xì)胞缺氧狀態(tài)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),滋養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)受限,膜聯(lián)蛋白表達(dá)水平下調(diào)。
　　 2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),子癇前期(體內(nèi)缺氧情況下),滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡尤其是早期凋亡發(fā)生改變:早發(fā)型輕度子癇前期組為3.21％,早發(fā)型子癇重度前期組為5.32％,晚發(fā)型輕度子癇前期組為2.43％,晚發(fā)型重度子癇前期組為4.28％,正常妊娠組為1.05％。
　　 3 在正常妊娠者的胎盤組織中未發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)微

5、血栓的形成。而在子癇前期患者胎盤組織中可以見(jiàn)到胎盤血管內(nèi)微血栓的形成,且隨著病情程度的加重,微血栓形成逐漸增多。
　　 結(jié)論:缺氧情況下,體外滋養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)受限;體內(nèi)滋養(yǎng)細(xì)胞(胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞)凋亡尤其是早期凋亡明顯增加。同時(shí),子癇前期患者胎盤組織血管中可見(jiàn)微血栓形成。
　　 第二部分膜聯(lián)蛋白A5在子癇前期患者體內(nèi)的表達(dá)
　　 目的:探討膜聯(lián)蛋白A5(annexirtA5)在子癇前期及正常妊娠孕婦外周血及胎盤組織中的表

6、達(dá)及其與子癇前期發(fā)病的關(guān)系。
　　 方法:選擇2007年12月-2009年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院分娩患者早發(fā)型子癇前期(輕度、重度)、晚發(fā)型子癇前期(輕度、重度)及健康妊娠孕婦各30例,共150例,收集其外周血及胎盤組織,應(yīng)用免疫組化研究annexin A5在胎盤組織中的定位、應(yīng)用Western blot、RT-PCR測(cè)定患者外周血及胎盤組織中annexin A5的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1 通過(guò)免

7、疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn),膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)主要在胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞表面高表達(dá)。與正常妊娠相比,子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞表面annexin A5染色減少。
　　 2 通過(guò)Western blot檢測(cè)子癇前期患者胎盤組織及外周血中annexinA5的表達(dá)水平。胎盤組織及外周血中annexin A5水平:早發(fā)型輕度子癇前期組分別為0.54±0.12及0.62±0.17,早發(fā)型重度子癇前期組分別為0.47±0.15及0.56±0.2

8、4,晚發(fā)型輕度子癇前期組分別為0.74±0.23及1.08±0.32,晚發(fā)型重度子癇前期組分別為0.68±0.28及0.72±0.21,正常妊娠組分別為1.73±0.35及1.55±0.27。與正常妊娠相比,子癇前期患者組織中的膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)表達(dá)明顯減少。
　　 3 通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)胎盤組織中annexin A5 mRNA的表達(dá)水平:早發(fā)型輕度子癇前期組為25.0±3.04,早發(fā)型重度子癇前期組為2

9、4.8±2.96,晚發(fā)型輕度子癇前期組為25.4±3.92,晚發(fā)型重度子癇前期組為25.1±2.74,正常妊娠組為30.6±2.68。
　　 結(jié)論:通過(guò)免疫組化和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)主要在胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞表面高表達(dá),與正常妊娠相比,子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞annexin A5表達(dá)下調(diào),可能影響胎盤凝血.纖溶系統(tǒng),促使子癇前期患者高凝狀態(tài)的形成,與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。
　　

10、 第三部分膜聯(lián)蛋白A2在子癇前期患者體內(nèi)的表達(dá)
　　 目的:探討膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2)在子癇前期及正常妊娠孕婦外周血及胎盤組織中的表達(dá)及其與子癇前期發(fā)病的關(guān)系。
　　 方法:選擇2007年12月-2009年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院分娩患者早發(fā)型子癇前期(輕度、重度)、晚發(fā)型子癇前期(輕度、重度)及健康妊娠組患者各30例,共150例,收集其外周血及胎盤組織,應(yīng)用免疫組化研究armexin A2在胎盤

11、組織中的定位、應(yīng)用Western blot、RT-PCR測(cè)定患者外周血及胎盤組織中annexinA2的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1 通過(guò)免疫組化發(fā)現(xiàn),膜聯(lián)蛋白A2(Annexin A2)主要在胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞表面高表達(dá)。與正常妊娠相比,子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞表面annexinA2染色減少。
　　 2 通過(guò)Western blot檢測(cè)子癇前期患者胎盤組織及外周血中annexinA2的表達(dá)水平。胎盤組織及外周血中an

12、nexin A2水平:早發(fā)型輕度子癇前期組分別為0.77±0.15及0.63±0.09,早發(fā)型重度子癇前期組分別為0.76±0.19及0.66±0.13,晚發(fā)型輕度子癇前期組分別為0.74±0.23及0.71±0.23,晚發(fā)型重度子癇前期組分別為0.81±0.35及0.59±0.14,正常妊娠組分別為1.82±0.18及0.50±0.04。與正常妊娠相比,子癇前期患者組織中的膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2)表達(dá)明顯減少。
　　

13、 3 通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)胎盤組織中annexin A2 mRNA的表達(dá)水平:早發(fā)型輕度子癇前期組為27.94±1.49,早發(fā)型重度子癇前期組為27.23±1.26,晚發(fā)型輕度子癇前期組為28.27±0.85,晚發(fā)型重度子癇前期組為28.54±0.65,正常妊娠組為32.34±0.71。
　　 結(jié)論:
　　 通過(guò)免疫組化和Western blot發(fā)現(xiàn),膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2)主要在胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞表面高表達(dá)

14、,與正常妊娠相比,子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞annexin A2表達(dá)下調(diào),抑制了子癇前期患者的纖溶系統(tǒng),促使子癇前期患者體內(nèi)高凝狀態(tài)的形成,與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。
　　 第四部分胎盤組織膜聯(lián)蛋白A5提取純化和體外抗凝試驗(yàn)
　　 目的:探討體內(nèi)及體外膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)的抗凝作用及其對(duì)體內(nèi)凝血系統(tǒng)的影響。
　　 方法:選擇2007年12月-2009年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院分娩健康妊娠者

15、,收集其胎盤組織進(jìn)行annexin A5提純。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同濃度annexin A5對(duì)凝血系統(tǒng)的影響。同時(shí)收集子癇前期組及正常妊娠組患者的外周血,測(cè)定凝血功能。
　　 結(jié)果:
　　 1.當(dāng)annexin A5的濃度≥30μg/ml時(shí),APTT逐漸延長(zhǎng),各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異并呈梯度性依賴性增加。
　　 2.與正常妊娠組比較,子癇前期患者外周凝血功能檢測(cè)未見(jiàn)明顯差異,但D-Dimmer升高。
　　 結(jié)論:

16、Annexin A5的抗凝活性同其濃度密切相關(guān)。當(dāng)annexin A5濃度≥30μg/ml,APTT與annexin A5濃度呈依賴性相關(guān)。隨著annexin A5濃度增加,APTT逐漸延長(zhǎng)。子癇前期患者外周血的APTT未見(jiàn)明顯變化,但D-Dimmer升高。
　　 第五部分相關(guān)抗體的檢測(cè)及分析
　　 目的:檢測(cè)子癇前期及正常妊娠孕婦外周血中的相關(guān)抗體,并分析其在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法:應(yīng)用ELIS

17、A方法檢測(cè)子癇前期及正常妊娠孕婦外周血中的anti-annexin A5、anti-annexin.A2、anti-β2GPI、ACL水平。
　　 結(jié)果:
　　 1 與正常妊娠相比,子癇前期患者外周血中anti-annexin A5水平增加,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.83)。
　　 2 與正常妊娠相比,子癇前期患者外周血中anti-annexin A2水平增加,且具有顯著性差異(P=0.02)。但子癇前期各組之間,

18、早發(fā)型子癇前期高于晚發(fā)型子癇前期,重度子癇前期高于輕度子癇前期,但各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.69)。
　　 3 與正常妊娠相比,子癇前期患者外周血中anti-β2GPI水平增加,且具有顯著性差異(P=0.04)。但子癇前期各組之間,早發(fā)型子癇前期高于晚發(fā)型子癇前期,重度子癇前期高于輕度子癇前期,但各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.79)。
　　 4 與正常妊娠相比,子癇前期患者外周血中ACL陽(yáng)性率增加。
　　 結(jié)