RhoA-Rock2與子癇前期.pdf

1、第一部分
　　 研究背景：子癇前期是妊娠期特有的、嚴(yán)重危害母嬰健康的妊娠晚期并發(fā)癥，其病因不明，發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。然而，此疾病在分娩后痊愈這一事實表明胎盤在其病因?qū)W中的主要作用。RhoA是小G蛋白家族中Rho家族的一個重要成員，Rock(Rhoassociated coiled coil forming protein kinase)屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族成員，是目前研究最為清楚的Rho 下游效應(yīng)分子，與細(xì)胞活動的許

2、多方面有關(guān)，在細(xì)胞的移動、增殖、生存這些基本方面起著重要作用。推測RhoA/Rock2與子癇前期的發(fā)生可能有一定關(guān)系。
　　 目的：檢測正常妊娠和子癇前期患者胎盤RhoA/Rock2的定位和表達(dá)，探討RhoA/Rock2在子癇前期發(fā)病中的作用。
　　 方法：收集15例早期妊娠、20例正常晚期妊娠和40例子癇前期患者絨毛或胎盤組織，通過免疫組織化學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)及免疫印記方法，研究RhoA/Rock2蛋白和mRNA在

3、子癇前期胎盤與正常妊娠胎盤的定位及表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：RhoA陽性表達(dá)主要分布于胎盤的滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿內(nèi)，早孕組除了表達(dá)在滋養(yǎng)細(xì)胞，其他部位少見，早孕組的表達(dá)高于正常晚孕組，差異有顯著性意義(P＜0.05)。
　　 晚孕組間質(zhì)細(xì)胞也可見少量表達(dá)。輕度與重度子癇前期組RhoA蛋白及mRNA表達(dá)顯著高于正常晚孕組(P＜0.05)，重度子癇前期組表達(dá)高于輕度，但差異無顯著性意義(P＞0.05)。Rock2 陽性表達(dá)主要分布于胎

4、盤的滋養(yǎng)細(xì)胞，胞漿和胞核均有表達(dá)，以胞漿為主，早孕組Rock2的表達(dá)部位在滋養(yǎng)細(xì)胞，其他部位少見，早孕組的表達(dá)高于正常晚孕組，差異有顯著性意義(P＜0.05)。晚孕組間質(zhì)細(xì)胞也可見少量表達(dá)。輕度與重度子癇前期組Rock2蛋白及mRNA表達(dá)顯著高于正常晚孕組(P＜0.05)，重度子癇前期組表達(dá)高于輕度，但差異無顯著性意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：RhoA/Rock2在正常妊娠胎盤形成過程中表達(dá)的變化可能與滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤、低氧反

5、應(yīng)及血管舒縮功能等有關(guān)，從而參與胎盤的正常形成及妊娠的一系列適應(yīng)性變化，其表達(dá)的異?？赡芘c子癇前期的胎盤淺浸潤、動脈痙攣、內(nèi)皮細(xì)胞功能受損等病理變化有關(guān)。第二部分研究背景：正常妊娠的完成有賴于孕婦心血管系統(tǒng)功能正常并具有良好的適應(yīng)性。眾所周知，子癇前期是以外周血管平滑肌痙攣、血壓升高為特征的癥候群。越來越多的研究顯示，RhoA/Rock 通路在許多疾病尤其是心血管系統(tǒng)疾病如高血壓、動脈粥樣硬化和冠狀動脈痙攣等的發(fā)生、發(fā)展中起著非常重要的

6、作用。盡管子癇前期的發(fā)病機(jī)制與原發(fā)性高血壓不盡相同，但其基礎(chǔ)的病理改變?nèi)缪墀d攣、外周小血管阻力增加等有其相似性。本研究采用原代培養(yǎng)正常晚期妊娠與子癇前期臍動脈平滑肌細(xì)胞，檢測RhoA/Rock2的表達(dá)差異。
　　 第二部分
　　 目的：檢測正常妊娠和子癇前期患者臍動脈血管平滑肌細(xì)胞RhoA/Rock2的表達(dá)，探討RhoA/Rock2在子癇前期血管病變中的作用。方法：收集4例正常晚期妊娠和6例子癇前期患者臍帶，原代培養(yǎng)臍

7、動脈平滑肌細(xì)胞，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)及免疫印記方法，研究RhoA/Rock2 mRNA和蛋白在正常妊娠和子癇前期之間的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：原代培養(yǎng)的人臍動脈平滑肌細(xì)胞呈典型的“峰與谷”樣特征，抗平滑肌肌動蛋白α-actin的免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示胞漿內(nèi)見絲狀、霧束狀染色，與細(xì)胞長軸平行，細(xì)胞純度>98[％]。兩組細(xì)胞均有RhoA、Rock2mRNA的表達(dá)，子癇前期組兩者均高于正常妊娠組，差異有顯著性意義(P＜0.05)。

8、兩組細(xì)胞均有RhoA、Rock2蛋白的表達(dá)，子癇前期組兩者均高于正常妊娠組，差異有顯著性意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：子癇前期臍帶血管平滑肌RhoA、Rock2的mRNA和蛋白表達(dá)均升高，可能與子癇前期血管病變有關(guān)。抑制這一通路可能會有利于子癇前期血管病變的改善。第三部分研究背景：血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷學(xué)說是公認(rèn)的子癇前期發(fā)病機(jī)理之一，認(rèn)為是導(dǎo)致子癇前期多系統(tǒng)損傷的病理基礎(chǔ),是子癇前期病理變化從胎盤局部向全身擴(kuò)散的載體。低氧是導(dǎo)

9、致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的重要原因之一。低氧可通過低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)激活20 多種基因轉(zhuǎn)錄，如血管內(nèi)皮生長因子、內(nèi)皮素-1、瘦素、腫瘤壞死因子-α和白介素-1 等，介導(dǎo)細(xì)胞的適應(yīng)性反應(yīng)，增加氧的運(yùn)輸、降低氧的消耗以及改變細(xì)胞的代謝活性，這些因子的表達(dá)異?？捎绊懽甜B(yǎng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞功能以及血管的張力,與子癇前期的發(fā)生密切相關(guān)。細(xì)胞將低氧信號轉(zhuǎn)化為HIF-1α活性增高的機(jī)制尚不太清楚。目前的研究提示RhoA/Rock 參與了細(xì)胞生物學(xué)的

10、許多方面。本實驗研究低氧對靜脈內(nèi)皮細(xì)胞RhoA/Rock 信號通路的影響，探討RhoA/Rock 通路對靜脈內(nèi)皮細(xì)胞低氧反應(yīng)的調(diào)節(jié)，為子癇前期的治療提供新的思路。
　　 第三部分
　　 目的：檢測低氧條件下，臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞RhoA、HIF-1α及一氧化氮(NO)的表達(dá)，及抑制RhoA/Rock 通路對HIF-1α及NO的影響。探討RhoA/Rock 對靜脈內(nèi)皮細(xì)胞低氧反應(yīng)的調(diào)節(jié)。
　　 方法：利用化學(xué)缺氧的方法誘

11、導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304 低氧，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)及免疫印記方法檢測RhoA 及HIF-1α的表達(dá)，硝酸還原酶法測細(xì)胞上清液NO表達(dá)，及給予Rock 抑制劑Y-27632 后表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：低氧條件下，臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞RhoA 及HIF-1α的mRNA和蛋白表達(dá)均升高，NO 表達(dá)下降，給予Y-27632 預(yù)處理后，同樣的低氧條件下，RhoA 及HIF-1α的mRNA和蛋白表達(dá)、NO的表達(dá)與常氧條件下比較無顯著性差異