下丘腦室旁核—垂體—甲狀腺胃動素的表達(dá)、調(diào)控及對胃運(yùn)動的影響研究.pdf

1、目的:
　　 觀察胃動素(MTL)在下丘腦室旁核(PVN)、垂體及甲狀腺的表達(dá),比較甲狀腺與小腸MTLmRNA基因序列的異同;探討MTL活性肽及其前體mRNA在甲狀腺良、惡性腫瘤組織中表達(dá)的差異及臨床意義;
　　 探討下丘腦PVN-垂體-甲狀腺對甲狀腺胃動素分泌及胃運(yùn)動的調(diào)控,以及甲狀腺胃動素對下丘腦PVN、垂體MTL表達(dá)的反饋調(diào)控;
　　 研究人甲狀腺髓樣癌(TT)細(xì)胞MTL的表達(dá)、分泌和調(diào)控,闡明MTT在TT

2、細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用和臨床意義。
　　 方法:
　　 1.采用熒光免疫組化技術(shù),觀察下丘腦PVN、垂體及甲狀腺內(nèi)MTL的定位和定性表達(dá);采用實(shí)時熒光定量PCR(Real-timePCR)、SouthernBlot和分子克隆、熒光免疫組化雙染等技術(shù),觀察人甲狀腺和小腸MTL前體mRNA基因序列異同;比較MTL,前體mRNA和蛋白在正常甲狀腺和甲狀腺良、惡性腫瘤組織中表達(dá)的異同。
　　 2.采用在體胃運(yùn)動和放

3、射免疫方法,觀察刺激/損毀下丘腦PVN、摘除垂體或甲狀腺大鼠胃竇移行性復(fù)合運(yùn)動(MMC)Ⅲ期變化及血漿三碘甲腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)和MTL含量的改變;采用Real-timePCR法,觀察電刺激/損毀下丘腦PVN及摘除甲狀腺對下丘腦-垂體-甲狀腺M(fèi)TL前體mRNA表達(dá)的影響;采用免疫組化法,觀察刺激/損毀下丘腦PVN對甲狀腺M(fèi)TL表達(dá)的改變,及甲狀腺摘除對PVN內(nèi)c-Fos表達(dá)的影響。
　　 3.采用Southernb

4、lot、Westernblot和熒光免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測TT細(xì)胞內(nèi)MTLmRNA和蛋白表達(dá),應(yīng)用Smallinterfering(siRNA)技術(shù)、MTT實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)分析MTL基因表達(dá)對TT細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠下丘腦PVN、垂體、甲狀腺及人垂體、甲狀腺組織均可見MTL免疫陽性細(xì)胞的表達(dá),且在甲狀腺M(fèi)TL與降鈣素(CT)共表達(dá)于同一細(xì)胞,即甲狀腺C細(xì)胞。<

5、br>　　 2.人甲狀腺M(fèi)TL前體mRNA基因序列與基因庫報(bào)道的人小腸MTL,前體mRNA基因序列(BC112314,NCBI,美國)相同。
　　 3.正常人甲狀腺和甲狀腺腫瘤組織內(nèi)均有MTL和MTL前體mRNA的表達(dá),其中甲狀腺髓樣癌MTL及其前體mRNA的表達(dá)顯著高于正常甲狀腺、甲狀腺乳頭狀癌、濾泡癌、嗜酸性腺瘤及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(P＜0.01);而甲狀腺乳頭狀癌和濾泡癌MTL及其前體mRNA的表達(dá)明顯低于正常甲狀腺、嗜酸性

6、腺瘤及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(P＜0.05);結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和嗜酸性腺瘤與正常甲狀腺相比,MTL及其前體mRNA的表達(dá)無顯著差異(P＞0.05)。
　　 4.下丘腦PVN對胃動素分泌及胃運(yùn)動的影響結(jié)果顯示,電刺激下丘腦PVN可使大鼠血漿和甲狀腺M(fèi)TL,含量顯著增高(P＜0.05),垂體和甲狀腺M(fèi)TL前體mRNA表達(dá)顯著增加(P＜0.05),胃竇MMCⅢ期樣收縮明顯增強(qiáng)(P＜0.05),該作用可部分被MTL受體拮抗劑GM-109阻斷(P＜

7、0.05);而電刺激甲狀腺摘除的大鼠PVN,與甲狀腺摘除假手術(shù)組相比,其血漿MTL含量顯著降低(P＜0.05),胃竇MMCⅢ期樣收縮明顯減弱(P＜0.05)。電損毀PVN后,大鼠血漿和甲狀腺內(nèi)MTL含量顯著降低(P＜0.05),甲狀腺和垂體內(nèi)MTL前體mRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.05),胃竇MMCⅢ期樣收縮明顯減弱(P＜0.05)。
　　 5.垂體對胃運(yùn)動的影響研究結(jié)果顯示,在垂體摘除大鼠,MMCⅢ期收縮頻率顯著減慢(P＜0.

8、05),PVN注射MTL,與垂體摘除+PVN注射NS組比較,MMC的收縮頻率顯著增加(P＜0.01),但與假手術(shù)垂體摘除+PVN注射MTL組比較,MMCⅢ期收縮頻率顯著降低(P＜0.05)。
　　 6.甲狀腺對胃動素的分泌、胃運(yùn)動的影響以及對下丘腦PVN、垂體MTL表達(dá)的反饋調(diào)控研究顯示,甲狀腺摘除后,大鼠血漿MTL含量顯著減少(2d,P＜0.01;4d,P＜0.05),下丘腦和垂體MTLmRNA表達(dá)顯著增加(2d,P＜0.05

9、),胃竇MMCⅢ期樣收縮活動明顯減弱(2d,P＜0.01:4d,P＜0.05),PVN內(nèi)c-Fos表達(dá)顯著增加(2h,P＜0.05)。
　　 7.TT細(xì)胞MTL的表達(dá)、分泌和調(diào)控研究顯示,TT細(xì)胞內(nèi)有大量MTL免疫陽性物及其前體mRNA的表達(dá),且MTL與CT共表達(dá)于同一細(xì)胞;TT細(xì)胞可分泌MTL,且生長素(GH)和促甲狀腺激素(TSH)可顯著促進(jìn)TT細(xì)胞MTL的分泌(P＜0.05);MTL,可顯著促進(jìn)TT細(xì)胞的增殖(P＜0.05

10、),干擾MTL基因表達(dá)可顯著抑制TT細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.甲狀腺和TT細(xì)胞有MTL及其前體mRNA表達(dá),且MTL與CT共表達(dá)于C細(xì)胞。
　　 2.人甲狀腺和人小腸MTL,前體mRNA基因序列相同。
　　 3.MTL及其前體mRNA在甲狀腺髓樣癌呈高表達(dá),而在甲狀腺乳頭狀癌和濾泡癌呈低表達(dá)。
　　 4.MTL參與下丘腦PVN-垂體-甲狀腺胃運(yùn)動的調(diào)控,甲狀