下丘腦室旁核經(jīng)迷走復(fù)合體對哮喘大鼠神經(jīng)調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討哮喘大鼠下丘腦室旁核(PVN)對哮喘發(fā)作的調(diào)控途徑，并研究PVN內(nèi)通過此途徑調(diào)控哮喘的神經(jīng)遞質(zhì)。 材料與方法：取健康雄性成年SD大鼠，腹腔注射含有卵蛋白(OVA)的抗原致敏液，霧化吸入OVA溶液誘發(fā)哮喘發(fā)作，經(jīng)行為學(xué)觀察，肺功能測定，肺組織HE染色等多種方法，確定哮喘模型制備成功。哮喘發(fā)作不同時間點(diǎn)采頸動脈血進(jìn)行血?dú)夥治?。哮喘大鼠多次激發(fā)，如連續(xù)10d，進(jìn)行腦HE染色觀察腦內(nèi)神經(jīng)元病理改變。應(yīng)用催產(chǎn)素(OT)免疫組織化

2、學(xué)染色法(sABC法)觀察哮喘狀態(tài)下PVN內(nèi)OT樣免疫反應(yīng)陽性(0T-LI)神經(jīng)元表達(dá)含量變化。運(yùn)用WGA-HRP逆行追蹤法與免疫組織化學(xué)染色法相結(jié)合的雙重標(biāo)記方法，在光鏡下觀察投射至迷走復(fù)合體(DVC)的下丘腦室旁核內(nèi)神經(jīng)元表達(dá)Fos情況；觀察PVN內(nèi)：HRP標(biāo)記物與Oq'免疫陽性物質(zhì)雙重標(biāo)記于同一神經(jīng)元的分布狀況：研究PVN內(nèi)Fos與0T雙標(biāo)記神經(jīng)元的分布狀況。最后，運(yùn)用神經(jīng)束路追蹤法與雙重酶免疫組織化學(xué)方法相結(jié)合的三重標(biāo)記方法，觀

3、察PVN內(nèi)HRP標(biāo)記物與Fos和oT免疫陽性物質(zhì)雙重標(biāo)記于同一神經(jīng)元的分布狀況。 結(jié)果： (1)哮喘發(fā)作5 min組和10min組的動脈血氧分壓(Pa02)比正常對照組明顯降低，血氧飽和度(Sa02)與正常對照組比較亦減少，且均有顯著性差異(P<0.01)。在哮喘發(fā)作10min時P<,a>o<,2>降至最低，且此時動脈血二氧化碳分壓(PaC02)較正常對照組高(P<0.05)。 (2)正常大鼠腦組織HE染色結(jié)果無

4、異常所見。哮喘大鼠腦組織HE染色結(jié)果在光學(xué)顯微鏡下觀察可見下丘腦內(nèi)包括PVN、下丘腦腹內(nèi)側(cè)核、下丘腦外側(cè)區(qū)等核團(tuán)組織及延髓孤束核、迷走神經(jīng)背核的部分神經(jīng)元有不同程度的變性和/或壞死，出現(xiàn)鬼影細(xì)胞，伴有單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤和少量的小膠質(zhì)細(xì)胞增生，以及血管周圍滲出等炎癥表現(xiàn)。 (3)哮喘大鼠的下丘腦切片上可見PVN中密集分布有OT-LI神經(jīng)元，它們主要位于PVN的外側(cè)亞核、背側(cè)亞核和內(nèi)側(cè)亞核以及前大細(xì)胞亞核，室周部和后側(cè)亞核亦有散

5、在分布。 (4)三類雙重標(biāo)記結(jié)果分別可見PVN內(nèi)出現(xiàn)HRP/Fos雙重標(biāo)記神經(jīng)元、HRP/OT雙重標(biāo)記神經(jīng)元、Fos/OT雙重標(biāo)記神經(jīng)元。 (5)三重標(biāo)記方法結(jié)果顯示：鏡下可見PVN內(nèi)同一神經(jīng)元內(nèi)HRP顆粒、Fos-LI物質(zhì)和OT-LI物質(zhì)三者共存，此神經(jīng)元為HRP/Fos/OT三重標(biāo)記神經(jīng)元。 結(jié)論： (1)哮喘大鼠多次激發(fā)產(chǎn)生腦炎癥，可能形成中樞致敏，進(jìn)一步加劇哮喘發(fā)作。 (2)哮喘大鼠發(fā)作時