慢性心衰大鼠下丘腦室旁核瞬時(shí)外向鉀通道蛋白對(duì)交感神經(jīng)的影響及中藥芪藶強(qiáng)心干預(yù)研究.pdf

1、目的：本研究以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，基于“腦為髓之海，真氣之所聚”探討復(fù)方中藥干預(yù)慢性心衰的中樞作用機(jī)制。采用冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎建立SD大鼠急性心肌梗死后心力衰竭模型，探討下丘腦室旁核（PVN）內(nèi)瞬時(shí)外向鉀通道蛋白Kv4.2、Kv4.3的變化與交感神經(jīng)活性增強(qiáng)、心功能變化及心室重構(gòu)的關(guān)系，同時(shí)觀察PVN內(nèi)AngⅡ/AT1R/MAPKS通路對(duì)Kv4.2、Kv4.3蛋白表達(dá)的影響及中藥芪藶強(qiáng)心對(duì)PVN內(nèi)瞬時(shí)外向鉀通道Kv4.2、Kv4.3蛋白和

2、RAS系統(tǒng)的干預(yù)作用，揭示復(fù)方中藥抑制慢性心衰交感神經(jīng)激活的中樞作用機(jī)制。
　　方法：⑴以SD大鼠為研究對(duì)象，采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支建立大鼠急性心肌梗死后心力衰竭模型，造模4周后，根據(jù)超聲心動(dòng)圖射血分?jǐn)?shù)評(píng)價(jià)心衰建模是否成功。將SD大鼠分為假手術(shù)組（Sham）（假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎）和心衰模型組（CHF）。超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)心功能；稱重計(jì)算兩組大鼠心重指數(shù)（HW/BW）、肺重指數(shù)（LW/BW）；ELISA檢測(cè)血漿去甲腎上腺素（NE）及

3、血清N端腦利鈉肽（NT-proBNP）含量；免疫組織化學(xué)、Western Blot和RT-PCR測(cè)定PVN內(nèi)Kv4.2、Kv4.3變化；PVN內(nèi)注射鉀通道特異性阻滯劑4-氨基吡啶（4-AP）后Power Lab生物信號(hào)系統(tǒng)記錄其對(duì)血壓、心率和腎交感神經(jīng)放電活性（RSNA）的影響，評(píng)價(jià)慢性心衰時(shí)PVN瞬時(shí)外向鉀通道蛋白對(duì)交感神經(jīng)的影響。⑵造模方法同第一部分，4周后將 SD大鼠分為假手術(shù)+人工腦脊液組（Sham+VEH）、心衰+人工腦脊液組

4、（CHF+VEH）、心衰+AT1R阻滯劑組（CHF+Losartan）、心衰+ERK抑制劑組（CHF+PD98059）、心衰+P38抑制劑組（CHF+SB203580），所有動(dòng)物經(jīng)側(cè)腦室插管連接滲透壓泵持續(xù)給藥。給藥4周后，超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)心功能；稱重計(jì)算各組大鼠HW/BW、LW/BW；ELISA檢測(cè)血漿NE及血清NT-proBNP含量；Western Blot檢測(cè)Sham+VEH組、CHF+VEH組、CHF+Losartan組PVN內(nèi)E

5、RK、P-ERK、P38、P-P38蛋白表達(dá)；給予ERK抑制劑、P38抑制劑后Western Blot分別檢測(cè)各組 PVN內(nèi) P-CREB、Kv4.2、Kv4.3蛋白表達(dá)，評(píng)價(jià)AngⅡ/AT1R/MAPKS通路在瞬時(shí)外向鉀通道蛋白表達(dá)中的調(diào)控作用。⑶造模方法及給藥方式同第二部分，造模4周后將SD大鼠分為正常組（Nomal）、假手術(shù)+人工腦脊液組（Sham+VEH）、心衰+人工腦脊液組（CHF+VEH）、心衰+AT1R阻滯劑組（CHF+L

6、osartan）、心衰+芪藶強(qiáng)心低劑量組（CHF+QLQX-L）、心衰+芪藶強(qiáng)心高劑量組（CHF+QLQX-H）。給藥4周后，超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)心功能；稱重計(jì)算各組大鼠 HW/BW、LW/BW；HE染色觀察心肌組織形態(tài)變化；ELISA檢測(cè)血漿 NE及血清NT-proBNP含量；Power Lab生物信號(hào)系統(tǒng)記錄各組RSNA情況；Western Blot法檢測(cè)PVN內(nèi)Kv4.2、Kv4.3及PVN內(nèi)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）、血管緊張素Ⅱ1型

7、受體（AT1R）蛋白表達(dá)，揭示復(fù)方中藥抑制慢性心衰交感神經(jīng)激活的中樞作用機(jī)制。
　　結(jié)果：①與Sham組大鼠比較，CHF組大鼠左室舒張末期內(nèi)徑（LVDd）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVDs）、左室舒張末期容積（LVVd）、左室收縮末期容積（LVVs）明顯升高，射血分?jǐn)?shù)（EF）及短軸縮短率（FS）明顯降低（P<0.01）。②與Sham組比較，CHF組大鼠血漿NE及血清NT-proBNP含量均顯著升高（P<0.01）。③與Sham組比較，C

8、HF組大鼠PVN內(nèi)Kv4.2、Kv4.3蛋白陽(yáng)性表達(dá)量減少。④與Sham組比較，CHF組PVN內(nèi)Kv4.2、Kv4.3 mRNA及蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05，P<0.01）。⑤與注射人工腦脊液比較，Sham組和 CHF組大鼠 PVN內(nèi)注射4-AP（0.4，0.8，1.6 nmol/200nl）劑量依賴性的升高血壓、心率、RSNA（P<0.05， P<0.01）；但與Sham組比較，CHF組血壓、心率、RSNA升高幅度顯著減?。≒<0

9、.01）。⑥與 Sham+VEH組比較，CHF+VEH組大鼠 LVDd、LVDs、LVVd、LVVs明顯增高，EF及FS明顯降低（P<0.01）；與CHF+VEH組比較， CHF+Losartan組、CHF+PD98059組、CHF+SB203580組LVDd、LVDs、LVVd、LVVs不同程度降低，EF及FS不同程度升高（P<0.01）。⑦與Sham+VEH組比較，CHF+VEH組大鼠血漿NE及血清NT-proBNP含量明顯升高（P

10、<0.01）；與 CHF+VEH組比較，CHF+Losartan組、CHF+PD98059組、CHF+SB203580組以上指標(biāo)不同程度降低（P<0.05， P<0.01）。⑧與Sham+VEH組比較，CHF+VEH組大鼠PVN內(nèi)P-CREB蛋白表達(dá)上調(diào)，Kv4.2、Kv4.3蛋白表達(dá)下調(diào)（P<0.01）；與 CHF+VEH組比較， CHF+Losartan組、CHF+PD98059組、CHF+SB203580組PVN內(nèi)P-CREB蛋白

11、表達(dá)不同程度下調(diào)，Kv4.2、Kv4.3蛋白表達(dá)不同程度上調(diào)（P<0.01）。3芪藶強(qiáng)心經(jīng)側(cè)腦室注射對(duì)下丘腦室旁核內(nèi)Kv4.2、Kv4.3蛋白及RAS系統(tǒng)的影響。⑨與Sham+VEH組比較，CHF+VEH組HW/BW、LW/BW升高（P<0.01）；與CHF+VEH組比較，CHF+ Losartan組、CHF+QLQX-H組不同程度的降低HW/BW、LW/BW（P<0.01），CHF+QLQX-L組降低LW/BW（P<0.01）；CHF

12、+Losartan組、CHF+QLQX-H組各參數(shù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。⑩與Sham+VEH組比較，CHF+VEH組血漿NE及血清NT-proBNP含量均顯著升高（P<0.01）；與CHF+VEH組相比，各給藥組降低血漿NE及血清 NT-proBNP水平（P<0.05，P<0.01）；各用藥組之間各參數(shù)兩兩比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：⑴CHF時(shí)PVN內(nèi)瞬時(shí)外向鉀通道蛋白Kv4.2、Kv4.3表達(dá)下調(diào)并