2,5-己二酮介導PI3K-Akt通路誘導大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)細胞凋亡.pdf

1、目的:觀察2，5-己二酮(HD)對大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織細胞凋亡作用，探討其作用機制。
　　方法:40只雄性SD大鼠購于大連醫(yī)科大學試驗動物中心，稱重并按隨機數(shù)表法分為4組。將HD以0.9％無菌生理鹽水進行稀釋，用腹腔注射方法對大鼠進行染毒。染毒組的染毒劑量分別為100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg，注射量為0.3 ml/100 g，對照組給予相同劑量生理鹽水。每周連續(xù)染毒5天，共5周。染毒結束后，每組各取兩

2、只動物經(jīng)4％多聚甲醛灌注固定脊髓和坐骨神經(jīng)。而每組其余的動物則提取脊髓和坐骨神經(jīng)，置于-80℃深凍冰箱中保存。固定后的組織經(jīng)石蠟包埋后制成石蠟切片，經(jīng)TUNEL-Hoechst染色，檢測各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)細胞的凋亡發(fā)生率。Western Blot檢測各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)Akt、p-Akt、Bad、p-Bad的蛋白表達;檢測脊髓和坐骨神經(jīng)組織細胞線粒體和胞漿蛋白中細胞色素C蛋白的表達水平。免疫共沉淀法檢測線粒體中Bad與Bcl-xL

3、的二聚體表達。分光光度法檢測Caspase-3的活力。采用SPSS13.0軟件，分析實驗數(shù)據(jù)。
　　結果:凋亡觀察TUNEL-Hoechst染色結果顯示，大鼠脊髓中，100 mg/kg、200mg/kg和400 mg/kg劑量凋亡的陽性細胞率分別是5.95％、7.84％和10.14％，均顯著高于對照組(0.11％)(p＜0.05)。坐骨神經(jīng)中，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg染毒組凋亡的陽性細胞率分別是5

4、.14％、9.23％和12.75％，均顯著高于與對照組(0.13％)(p＜0.05)。Akt和Bad蛋白表達Western Blot檢測結果發(fā)現(xiàn)，HD染毒組大鼠脊髓中Akt和Bad蛋白的表達與對照組相比均無顯著性差異(p＞0.05)，然而p-Akt和p-Bad的表達均顯著低于對照組(p＜0.05)，并呈現(xiàn)劑量依賴性降低。各染毒組大鼠坐骨神經(jīng)組織中，Akt和Bad蛋白的表達與對照組相比均無顯著性差異(p＞0.05)，而p-Akt和p-Ba

5、d的表達顯著低于對照組(p＜0.05)，并隨著劑量增加而降低。細胞色素C蛋白表達在染毒組大鼠脊髓與坐骨神經(jīng)組織，其線粒體中細胞色素C表達顯著低于對照組(p＜0.05)，而胞漿中細胞色素C的表達顯著高于對照組(p＜0.05)。Bad/Bcl-xL二聚體表達免疫共沉淀檢測結果顯示，脊髓與坐骨神經(jīng)組織線粒體中，Bad與Bcl-xL的二聚體表達顯著高于對照組(p＜0.05)，且呈現(xiàn)劑量依賴性升高。Caspase-3活性100 mg/kg、200

6、 mg/kg和400 mg/kg染毒組大鼠脊髓Caspase-3活力分別為131％、219％和330％，均顯著高于對照組(p＜0.05)，且呈現(xiàn)劑量依賴性升高。100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg染毒組大鼠坐骨神經(jīng)Caspase3活力分別為121％、213％和299％，均顯著高于對照組(p＜0.05)，且呈現(xiàn)劑量依賴性升高。
　　結論:HD暴露誘導大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織細胞凋亡，下調(diào)p-Akt和p-Bad蛋白