D-半乳糖癡呆模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞PI3K-AKt信號(hào)通路的變化及EGB的作用研究.pdf

1、目的：觀察D-半乳糖癡呆模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞P13K/AKt信號(hào)通路的變化及銀杏葉提取物(extract ginkgo biloba，EGB)的作用機(jī)制研究，為EGB臨床防治癡呆提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 方法：采用D-半乳糖腹腔注射制作癡呆動(dòng)物模型。48只SD大鼠隨機(jī)分為6組：對(duì)照組(Con)、半乳糖組(Gal)、EGB低劑量組(EGB-L)、EGB中劑量組(EGB-M)、EGB高劑量組(EGB-H)和治療組(Therapy)。

2、用Y迷宮測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；焦油紫染色和TUNEL法檢測(cè)海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞凋亡；免疫組織化學(xué)染色和SDS聚丙烯酰胺凝膠轉(zhuǎn)移電泳(Western blotting，WB)檢測(cè)p-P13K、p-AKt、P13K、AKt和Caspase-9 p35的表達(dá)水平并觀察EGB的保護(hù)作用。 結(jié)果： 1.Y迷宮檢測(cè)顯示：造模6w后與Con組相比，Gal組學(xué)習(xí)嘗試次數(shù)明顯增加，記憶正確次數(shù)明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

3、0.01)且其達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的平均時(shí)呈逐漸上升趨勢(shì)；造模8w后EGB三個(gè)劑量組與Gal組比較學(xué)習(xí)嘗試次數(shù)不同程度的減少，記憶正確次數(shù)不同程度的增加，其中EGB中、高劑量組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)且其達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的平均時(shí)變化曲線基本平穩(wěn)；與治療前相比，Therapy組在治療2w后學(xué)習(xí)嘗試次數(shù)不同程度的減少(P<0.05)，記憶正確次數(shù)不同程度的增加(P<0.01)，達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的平均時(shí)變化曲線呈逐漸下降趨勢(shì)。 2.焦油紫染

4、色顯示：Gal組和Therapy組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞層不完整，許多細(xì)胞胞體縮小、胞核固縮深染，損傷嚴(yán)重，排列紊亂，神經(jīng)元脫失伴有大量膠質(zhì)細(xì)胞增生；EGB三個(gè)劑量組與Gal組比較海馬CA1區(qū)細(xì)胞損傷有不同程度的減輕，以EGB-H組最明顯。 3.TUNEL法檢測(cè)顯示：Con組海馬CA1區(qū)罕見TUNEL陽(yáng)性神經(jīng)元；Gal組可見較多TUNEL陽(yáng)性神經(jīng)元，與Con組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；EGB三個(gè)劑量組TUNEL陽(yáng)性神經(jīng)

5、元不同程度的減少，與Gal組相比，其中EGB-M組和EGB-H組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而Therapy組與Gal組相比陽(yáng)性神經(jīng)元變化沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.免疫組織化學(xué)染色顯示：ICon組海馬CA1區(qū)可見較多p-P13K、p-AKt陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞而Gal組陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與Gal組相比，EGB-M組、EGB-H組(P<0.01)和Therapy組(P<0.05)陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞均有不

6、同程度的增加，EGB.L組p-AKt陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞亦增加(P<0.05)而p-P13K的變化沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IICon組海馬CA1區(qū)偶見Caspase-9P35陽(yáng)性神經(jīng)元而Gal組可見較多Caspase-9P35陽(yáng)性神經(jīng)元，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；EGB三個(gè)劑量組Caspase-9P35陽(yáng)性神經(jīng)元均有不同程度的減少，與Gal組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中EGB-L組(P<0.05)而EGB-M組和EGB-H組(P<0.01)；T

7、herapy組與Gal組相比變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5.Western blotting顯示：Gal組海馬CAl區(qū)p-P13K、p-AKt的活性明顯降低，Caspase-9p35蛋白表達(dá)明顯增加，與Con組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與Gal組相比，EGB三個(gè)劑量組p-P13K、p-AKt的活性明顯增強(qiáng)，Caspase-9p35蛋白表達(dá)明顯減少，其中EGB-M組和EGB-H組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Therap

8、y組與Gal組相比，p-P13K(P<0.01)和p-AKt(P<0.05)的活性均明顯增強(qiáng)而Caspase-9 p35蛋白表達(dá)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；P13K、AKt蛋白表達(dá)在各組之間變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.D-半乳糖癡呆模型大鼠有學(xué)習(xí)記憶障礙，海馬CA1區(qū)存在細(xì)胞凋亡及P13K-AKt-caspase9信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的障礙。 2.EGB可通過激活P13K-AKt-caspase9信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、抑制海馬區(qū)神