柚皮素查爾酮通過誘導細胞自噬、凋亡及PI3K-Akt信號通路調(diào)控抗膠質(zhì)瘤作用.pdf

1、目的:
　　研究的主要目的是探討柚皮素查爾酮對U87MG膠質(zhì)瘤細胞和異種移植小鼠模型的體外和體內(nèi)抗膠質(zhì)瘤作用。
　　方法:
　　首先進行柚皮素查爾酮對U87MG膠質(zhì)瘤細胞的體外抗腫瘤作用試驗。將U87MG膠質(zhì)瘤細胞中加入不同濃度(0，2.5，5，10，50，75和100μM)柚皮素查爾酮，培養(yǎng)不同的時間(24，48，72h)，分別用MTT比色法檢測細胞增殖。將U87MG膠質(zhì)瘤細胞中加入不同濃度（0，10，50和100μ

2、M）柚皮素查爾酮培養(yǎng)48小時后，分別用吖啶橙/溴化乙錠和Hoechst33342染色后在熒光顯微鏡下評估細胞凋亡。將U87MG膠質(zhì)瘤細胞中加入不同濃度(0，10，50和100μM)柚皮素查爾酮培養(yǎng)48小時后，在透射電子顯微鏡下觀察細胞中自噬空泡的數(shù)量和大小。將U87MG膠質(zhì)瘤細胞中加入不同濃度(0，10，75和100μM)柚皮素查爾酮培養(yǎng)48小時后，AnnexinⅤ-FITC和PI染色處理后，使用流式細胞儀檢測柚皮素查爾酮對U87MG人

3、膠質(zhì)瘤細胞的早期凋亡和晚期凋亡作用。將U87MG膠質(zhì)瘤細胞首先于無血清培養(yǎng)基中進行饑餓處理4小時，然后加入不同濃度(0，10，50和100μM)柚皮素查爾酮培養(yǎng)40分鐘和48小時后用Western blot方法對柚皮素查爾酮對PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導蛋白的作用進行評價。
　　使用異種移植小鼠模型進行柚皮素查爾酮對U87MG膠質(zhì)瘤細胞的體內(nèi)抗腫瘤作用試驗。將U87MG細胞皮下注射于裸鼠右后肢處建立異種移植小鼠模型。將建模成功小鼠分為

4、5組，分別給予不同劑量柚皮素查爾酮注射(5，20，40 and80mg/kg)。24天后，處死小鼠，測量腫瘤的重量、長度和寬度，計算腫瘤的體積。
　　結(jié)果:
　　柚皮素查爾酮對U87MG細胞的增殖有抑制作用，其細胞毒性作用隨著濃度的增加而增強，同時隨著作用時間的增加而增強。也就是說，柚皮素查爾酮對U87MG細胞的細胞毒性作用同時具有劑量依賴性和時間依賴性。加入柚皮素查爾酮的U87MG細胞經(jīng)過吖啶橙/溴化乙錠染色后，通過熒光顯

5、微鏡可觀察到細胞收縮與細胞凋亡體的形成。經(jīng)hoechst33342染色后，在熒光顯微鏡下可見染色質(zhì)濃縮，DNA碎片，胞膜空泡。這些都是細胞凋亡的形態(tài)學表現(xiàn)特征。透射電子顯微鏡觀察表明，柚皮素查爾酮能夠誘導自噬空泡的形成，而且自噬空泡的數(shù)量和體積隨柚皮素查爾酮劑量的增加而增加。流式細胞儀檢測證明，柚皮素查爾酮能夠誘導U87MG人膠質(zhì)瘤細胞早期凋亡和晚期凋亡。柚皮素查爾酮同時能夠抑制磷酸化和非磷酸化的PI3K和Akt蛋白，抑制NF-к B、