系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)庵苎獑蝹€(gè)核細(xì)胞蛋白組學(xué)的初步研究.pdf

1、目的：系統(tǒng)性紅斑狼瘡這一典型的自身免疫性疾病，其病理生理機(jī)制的闡明及疾病明確定義的提出一直受到復(fù)雜的臨床癥狀和多發(fā)性臟器系統(tǒng)受累的阻礙。現(xiàn)行的診斷標(biāo)準(zhǔn)依賴(lài)于已出現(xiàn)的臨床癥狀而未強(qiáng)調(diào)涉及疾病發(fā)展過(guò)程的自身免疫狀態(tài)，而臨床癥狀判斷具有主觀性：早期非典型癥狀易被忽略，一旦出現(xiàn)典型的臨床癥狀，患者往往已經(jīng)伴隨明顯的免疫系統(tǒng)受損和重要臟器的器質(zhì)性病變甚至失代償，預(yù)后大大下降，亟需準(zhǔn)確有效的早期診斷方法。近年來(lái)蛋白組學(xué)這一分子生物學(xué)的新技術(shù)為自身免

2、疫機(jī)制的闡明帶來(lái)了新的方法。隨著蛋白組學(xué)研究技術(shù)的進(jìn)步，通過(guò)對(duì)疾病蛋白質(zhì)水平的綜合研究，該學(xué)科在分析SLE病理機(jī)制、提高早期診斷水平、發(fā)現(xiàn)疾病特異性標(biāo)志物、確定治療靶位和藥物開(kāi)發(fā)等方面表現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)與前景。目前大部分的研究集中在血清、尿液這兩種標(biāo)本上，較之該領(lǐng)域細(xì)胞外液的研究，免疫細(xì)胞胞內(nèi)蛋白組學(xué)的研究還處于相對(duì)空白的狀態(tài)。SLE發(fā)病機(jī)制中涉及多種免疫事件，包含各種免疫細(xì)胞參與。我們以包含了T、B、NK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞在內(nèi)的外周血單

3、個(gè)核細(xì)胞(PBMC)為切入點(diǎn)，就SLE對(duì)PBMC蛋白表達(dá)的影響做一探討，為運(yùn)用蛋白組學(xué)方法研究SLE的早期發(fā)病及提示疾病活動(dòng)提供依據(jù)。 方法：分別提取14名SLE患者及9名健康獻(xiàn)血者的PBMC，采用雙向電泳技術(shù)分離全蛋白質(zhì)組，對(duì)部分差異明顯、重復(fù)性高的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行離子阱高效液相色譜串連質(zhì)譜分析(IonTrapHPLC-Chip-MS/MS)，測(cè)定其肽序列標(biāo)簽圖(PST)，在互聯(lián)網(wǎng)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定差異蛋白。 結(jié)果：

4、 1.獲得了重復(fù)性較好的雙向電泳圖譜。 2.圖像分析：1名SLE患者、4名健康獻(xiàn)血者PBMC蛋白匹配點(diǎn)為1084個(gè)，其中SLE高表達(dá)及特異表達(dá)蛋白點(diǎn)為71個(gè)及17個(gè)，健康獻(xiàn)血者高表達(dá)及特異表達(dá)蛋白點(diǎn)為45個(gè)及20個(gè)。 3.對(duì)表達(dá)差異重復(fù)性高的30個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索后，鑒定出28個(gè)蛋白質(zhì)的PST，與27個(gè)蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)，分別為：3-磷酸甘油醛脫氫酶、酪氨酸翻譯合成酶、糖原磷酸化酶、轉(zhuǎn)酮醇酶、丙酮酸激酶M1

5、/M2型同功酶、丙糖磷酸異構(gòu)酶、延長(zhǎng)因子1α1、磷酸甘油酸激酶1、α烯醇化酶、斑聯(lián)蛋白、凝溶膠蛋白前體、脯氨酸絲氨酸蘇氨酸磷酸酶相互作用蛋白2、腺苷酸環(huán)化酶相關(guān)蛋白1、細(xì)絲蛋白C、細(xì)絲蛋白A、WD重復(fù)包含蛋白1、踝蛋白1、微管蛋白β鏈、整合素耦聯(lián)蛋白激酶、PDZ-LIM結(jié)構(gòu)域蛋白7、酪氨酸蛋白激酶CSK、破骨細(xì)胞刺激因子1、膜聯(lián)蛋白A5、T復(fù)合體蛋白I亞單位、熱休克蛋白β1、熱休克同源蛋白71和動(dòng)力蛋白I樣蛋白。其中在SLE患者PBMC

6、中高表達(dá)或特異表達(dá)的有凝溶膠蛋白前體、磷酸甘油酸激酶1、WD重復(fù)包含蛋白1、α烯醇化酶、破骨細(xì)胞刺激因子1、微管蛋白β鏈、膜聯(lián)蛋白A5和熱休克同源蛋白71這8類(lèi)蛋白質(zhì)，其余均在SLE患者中降低表達(dá)或不表達(dá)。 結(jié)論： 1.應(yīng)用蛋白組學(xué)技術(shù)對(duì)SLE患者PBMC特異性蛋白進(jìn)行初步篩選和鑒定，發(fā)現(xiàn)了丙糖磷酸異構(gòu)酶、膜聯(lián)蛋白A5、熱休克同源蛋白71等27個(gè)與SLE發(fā)病相關(guān)，可能成為SLE生物學(xué)標(biāo)簽的蛋白質(zhì)。 2.SLE患者