系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個核細胞神經(jīng)顆粒素表達研究.pdf

1、第一部分
　　目的:從系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個核細胞中克隆神經(jīng)顆粒素(Neurogranin,Ng)基因,從而明確其與腦組織中Ng的表達形式是否存在差異。
　　方法:在NgmRNA編碼區(qū)兩端設(shè)計特異性引物,從SLE患者外周血單個核細胞中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后作為模板,進行PCR擴增,產(chǎn)物測序。然后,將PCR產(chǎn)物構(gòu)建至PMD18-T載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞,以菌落PCR篩選陽性克隆并進行序列測定。<

2、br>　　結(jié)果:獲得Ng基因3種可變剪接體,其中兩種可變剪接體尚未報道。
　　結(jié)論:兩種新的Ng剪接變異體存在于SLE患者外周血單個核細胞中,其功能有待進一步研究。
　　第二部分:
　　目的:研究神經(jīng)顆粒素(Neurogranin,Ng)基因和其剪接變異體在SLE患者外周血單個核細胞(PBMCs)的表達水平,分析其與SLE疾病活動度和下游效應(yīng)分子CaMKIV之間的關(guān)系,進一步闡明Ng在SLE發(fā)病機制中的作用。
　

3、　方法:收集45例SLE患者,24例健康志愿者外周血標本,采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)檢測外周血單個核細胞中Ng及其剪接變異體和CaMKIV的表達,使用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)資料進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:1.SLE患者Ng基因mRNA表達水平高于健康對照組,且活動期患者外周血單核細胞Ng表達較穩(wěn)定期和正常對照組呈上調(diào)趨勢,而Ng的表達水平在SLE病情穩(wěn)定組和正常對照組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);

4、>　　2.SLE患者Ng-IN基因mRNA表達水平與健康對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);
　　3.SLE患者Ng基因mRNA表達水平與SLEDAI評分呈正相關(guān)(r=0.666,P<0.01)
　　4.SLE患者Ng基因mRNA表達水平與CaMKIV呈正相關(guān)((r=0.460,P<0.01)。
　　結(jié)論:SLE患者NgmRNA表達上調(diào),且與SLE疾病活動度呈正相關(guān),提示Ng基因異位表達可能與SLE的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。另外