系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個(gè)核細(xì)胞CREBL2,CDKN1B,GPR19基因表達(dá)研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種典型的較常見的自身免疫性結(jié)締組織病，以多種自身抗體的產(chǎn)生和循環(huán)免疫復(fù)合物清除障礙為特征，患者臨床表現(xiàn)的輕重緩急存在較大的個(gè)體差異，預(yù)后也不盡相同。目前大多認(rèn)為其發(fā)病與遺傳背景、個(gè)體生存環(huán)境、體內(nèi)的雌激素水平等相關(guān)，其中遺傳基礎(chǔ)的影響顯著。
　　隨著人類基因組學(xué)、遺傳學(xué)研究方法的進(jìn)步，對(duì)SLE的相關(guān)遺傳學(xué)發(fā)生機(jī)制的研究越來越深入。不同地區(qū)的多個(gè)研究團(tuán)隊(duì)對(duì)不同人群進(jìn)行研究，目前已發(fā)現(xiàn)超過60個(gè)S

2、LE的易感基因或位點(diǎn)。2013年楊萬(wàn)嶺等對(duì)多個(gè)人群的研究結(jié)果進(jìn)行Meta分析發(fā)現(xiàn)，染色體12p13.1區(qū)域三個(gè)位置相鄰的SLE易感基因基因CREBL2、CDKN1B、GPR19，且三者之間存在最小的有用連鎖不平衡（minimum linkage disequilibrium，LD）。其中 CREBL2, CDKN1B, GPR19對(duì)應(yīng)的單個(gè)核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）rs12822

3、507, rs10845606, rs34330與SLE之間的相關(guān)性均達(dá)到基因組水平的意義（3.83×10-17≤Pcombined≤2.23×10-8）。
　　CREBL2（cAMP responsive element binding protein like2）有48個(gè)堿基片段與CREB基因相同，該片段編碼CREB蛋白的bZIP區(qū)域，可與DNA結(jié)合，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的進(jìn)程。GPR19（G protein-coupled re

4、ceptor19）在人體胚胎干細(xì)胞中高表達(dá)，編碼孤兒受體蛋白，有GPCRs（G protein-coupled receptors）家族的7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，其與多巴胺 D2受體家族、腎上腺素受體、神經(jīng)肽 Y受體之間結(jié)構(gòu)非常相似。CDKN1B（cyclin-dependent kinase inhibitor1B）編碼細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，抑制DNA合成前期（G1期）到DNA合成期（S期）的進(jìn)程，負(fù)調(diào)控細(xì)胞循環(huán)，阻礙細(xì)胞分化；同時(shí)，

5、參與調(diào)控T細(xì)胞免疫耐受，以及CD4+T和CD8+T之間的動(dòng)態(tài)平衡。既往已發(fā)現(xiàn)12p13區(qū)域多個(gè)基因參與自身免疫性疾病的發(fā)生，如NKG2, CD4, C1s/r, CD163, AID等，有關(guān)CREBL2, CDKN1B, GPR19與SLE的關(guān)聯(lián)研究尚未深入。本實(shí)驗(yàn)利用基因分析的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-time Quantitative polymerase chain reaction, qPCR），檢測(cè)CREBL2, CD

6、KN1B, GPR19在SLE患者和健康對(duì)照個(gè)體中的相對(duì)表達(dá)量，進(jìn)一步探索CREBL2, CDKN1B, GPR19與SLE發(fā)病的關(guān)聯(lián)及可能的作用機(jī)制。
　　目的：研究SLE患者和正常對(duì)照個(gè)體的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）中CREBL2, CDKN1B, GPR19基因的相對(duì)表達(dá)量和組間的表達(dá)水平差異，探索基因的表達(dá)水平與SNP點(diǎn)rs12822507, rs10845606, rs34330之間的eQTL效應(yīng)，以及基因表達(dá)水平與

7、SLE臨床表型、SLEDAI評(píng)分之間的相關(guān)性。
　　方法：收集SLE女性患者119例和女性正常對(duì)照129例的外周靜脈血樣本及臨床病歷信息，從PBMC中提取出RNA并經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得模板cDNA（complementary DNA），加入熒光染料試劑和基因CREBL2, CDKN1B, GPR19及內(nèi)參基因GAPDH對(duì)應(yīng)的引物，通過ABI7500HT測(cè)定PBMC中CREBL2, CDKN1B, GPR19的相對(duì)表達(dá)量；應(yīng)用ABI37

8、30XL測(cè)序儀對(duì)所有研究對(duì)象的SNP點(diǎn)rs12822507, rs10845606, rs34330進(jìn)行基因分型；收集整理基因表達(dá)、基因分型結(jié)果以及臨床資料信息，用SPSS17.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：SLE病例組中CREBL2和CDKN1B的相對(duì)表達(dá)量明顯低于對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。未發(fā)現(xiàn)SNP點(diǎn) rs12822507, rs34330, rs10845606與基因CREBL2, CDKN1B,

9、GPR19表達(dá)量之間存在eQTL作用，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CREBL2在CRP升高，或抗SSA/Ro抗體陽(yáng)性，或光敏感陰性的SLE患者中表達(dá)水平降低，CDKN1B在C3正?；蛏?，或抗SSA/Ro抗體陽(yáng)性，或SLEDAI<10的SLE患者中表達(dá)水平降低(P<0.05)。未發(fā)現(xiàn)基因表達(dá)量與SLEDAI之間存在線性相關(guān)(P>0.05)。
　　結(jié)論：CREBL2, CDKN1B與SLE患病存在相關(guān)性，且CREBL2, CD