系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個核細胞CREBL2,CDKN1B,GPR19基因表達研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種典型的較常見的自身免疫性結締組織病，以多種自身抗體的產(chǎn)生和循環(huán)免疫復合物清除障礙為特征，患者臨床表現(xiàn)的輕重緩急存在較大的個體差異，預后也不盡相同。目前大多認為其發(fā)病與遺傳背景、個體生存環(huán)境、體內的雌激素水平等相關，其中遺傳基礎的影響顯著。
　　隨著人類基因組學、遺傳學研究方法的進步，對SLE的相關遺傳學發(fā)生機制的研究越來越深入。不同地區(qū)的多個研究團隊對不同人群進行研究，目前已發(fā)現(xiàn)超過60個S

2、LE的易感基因或位點。2013年楊萬嶺等對多個人群的研究結果進行Meta分析發(fā)現(xiàn)，染色體12p13.1區(qū)域三個位置相鄰的SLE易感基因基因CREBL2、CDKN1B、GPR19，且三者之間存在最小的有用連鎖不平衡（minimum linkage disequilibrium，LD）。其中 CREBL2, CDKN1B, GPR19對應的單個核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）rs12822

3、507, rs10845606, rs34330與SLE之間的相關性均達到基因組水平的意義（3.83×10-17≤Pcombined≤2.23×10-8）。
　　CREBL2（cAMP responsive element binding protein like2）有48個堿基片段與CREB基因相同，該片段編碼CREB蛋白的bZIP區(qū)域，可與DNA結合，參與調節(jié)細胞周期的進程。GPR19（G protein-coupled re

4、ceptor19）在人體胚胎干細胞中高表達，編碼孤兒受體蛋白，有GPCRs（G protein-coupled receptors）家族的7個跨膜結構域，其與多巴胺 D2受體家族、腎上腺素受體、神經(jīng)肽 Y受體之間結構非常相似。CDKN1B（cyclin-dependent kinase inhibitor1B）編碼細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，抑制DNA合成前期（G1期）到DNA合成期（S期）的進程，負調控細胞循環(huán)，阻礙細胞分化；同時，

5、參與調控T細胞免疫耐受，以及CD4+T和CD8+T之間的動態(tài)平衡。既往已發(fā)現(xiàn)12p13區(qū)域多個基因參與自身免疫性疾病的發(fā)生，如NKG2, CD4, C1s/r, CD163, AID等，有關CREBL2, CDKN1B, GPR19與SLE的關聯(lián)研究尚未深入。本實驗利用基因分析的實時熒光定量PCR技術（Real-time Quantitative polymerase chain reaction, qPCR），檢測CREBL2, CD

6、KN1B, GPR19在SLE患者和健康對照個體中的相對表達量，進一步探索CREBL2, CDKN1B, GPR19與SLE發(fā)病的關聯(lián)及可能的作用機制。
　　目的：研究SLE患者和正常對照個體的外周血單個核細胞（PBMCs）中CREBL2, CDKN1B, GPR19基因的相對表達量和組間的表達水平差異，探索基因的表達水平與SNP點rs12822507, rs10845606, rs34330之間的eQTL效應，以及基因表達水平與

7、SLE臨床表型、SLEDAI評分之間的相關性。
　　方法：收集SLE女性患者119例和女性正常對照129例的外周靜脈血樣本及臨床病歷信息，從PBMC中提取出RNA并經(jīng)逆轉錄反應獲得模板cDNA（complementary DNA），加入熒光染料試劑和基因CREBL2, CDKN1B, GPR19及內參基因GAPDH對應的引物，通過ABI7500HT測定PBMC中CREBL2, CDKN1B, GPR19的相對表達量；應用ABI37

8、30XL測序儀對所有研究對象的SNP點rs12822507, rs10845606, rs34330進行基因分型；收集整理基因表達、基因分型結果以及臨床資料信息，用SPSS17.0軟件做統(tǒng)計學分析。
　　結果：SLE病例組中CREBL2和CDKN1B的相對表達量明顯低于對照組，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。未發(fā)現(xiàn)SNP點 rs12822507, rs34330, rs10845606與基因CREBL2, CDKN1B,

9、GPR19表達量之間存在eQTL作用，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。CREBL2在CRP升高，或抗SSA/Ro抗體陽性，或光敏感陰性的SLE患者中表達水平降低，CDKN1B在C3正?；蛏?，或抗SSA/Ro抗體陽性，或SLEDAI<10的SLE患者中表達水平降低(P<0.05)。未發(fā)現(xiàn)基因表達量與SLEDAI之間存在線性相關(P>0.05)。
　　結論：CREBL2, CDKN1B與SLE患病存在相關性，且CREBL2, CD