冠心病患者紅細(xì)胞CR1與免疫復(fù)合物結(jié)合效率的初探.pdf

1、背景：
　　補體受體1（complement receptor type1，CR1）是一種表達(dá)于多種細(xì)胞膜上的多態(tài)性單鏈跨膜糖蛋白，是補體 C3b、iC3b和C4b片段的受體。紅細(xì)胞膜上 CR1主要的生理功能是參與清除外周循環(huán)中的免疫復(fù)合物（immune complexes,IC）。一系列研究發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞膜上CR1的表達(dá)量、CR1與IC的結(jié)合效率下降，導(dǎo)致免疫復(fù)合物的沉積，加重了系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic Lupus Ery

2、thematosus，SLE）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）等自身免疫病的病變程度?；诙嗄陝用}粥樣硬化（atherosclerosis，AS）與自身免疫關(guān)系方面的研究成果，AS可能是一種的自身免疫病這一觀點得到學(xué)者們的廣泛認(rèn)同，已經(jīng)在冠心病（coronary heart disease，CHD）患者及 AS實驗動物血漿中發(fā)現(xiàn)多種高濃度自身抗體[如抗熱休克蛋白自身抗體、抗氧化修飾低密度脂蛋白自身抗體（

3、anti-oxidized low density lipoprotein immunoglobulin G,anti-ox-LDL IgG）等]，其中anti-ox-LDL IgG與AS形成關(guān)系的研究最多。AS作為一種可能的自身免疫病，可能出現(xiàn)類似于其他自身免疫病紅細(xì)胞膜上CR1的表達(dá)量、CR1與IC的結(jié)合效率下降，導(dǎo)致IC的沉積，最終加速病變進(jìn)展。目前國內(nèi)外關(guān)于CR1與AS關(guān)系的研究較少，2009年Boiocchi C等研究發(fā)現(xiàn)CH

4、D患者組與健康人組CR1基因型頻率無顯著性差異。
　　研究目的：
　　通過采集胸痛（chest pain，CP）患者及健康人群外周血細(xì)胞、血漿，利用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）、免疫沉淀法（immunoprecipitation，IP）、酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）、熒光顯微鏡等技術(shù)，分析外周血紅細(xì)胞CR1表達(dá)量、CR1與IC結(jié)合效

5、率、紅細(xì)胞上丙二醛修飾的低密度脂蛋白（malondialdehyde oxidized low density lipoprotein，MDA-LDL）表達(dá)量（用于間接反映紅細(xì)胞上結(jié)合的MDA-LDL免疫復(fù)合物）、血漿中低密度脂蛋白-低密度脂蛋白抗體免疫復(fù)合物（low density lipoprotein immune complexes，LDL-IC）濃度、血漿中補體 C3（complement3，C3）濃度等，初步探討參與外周循環(huán)

6、IC清除途徑的幾個重要成分在CHD患者中是否存在異常改變，導(dǎo)致與AS相關(guān)IC未能得到有效清除，最終加速AS的進(jìn)展。
　　研究內(nèi)容和方法：
　　一、病例、健康人群選擇及分組
　　病例選擇2011-9月～2012年2月我院心血管內(nèi)科住院患者共46例，平均年齡65±11歲。全部患者均行冠脈造影（coronary angiography，CAG）檢查，參照診斷標(biāo)準(zhǔn)將胸痛（chest pain，CP）患者分為：正常冠脈患者組（n

7、ormal coronary arteries，NCA）、穩(wěn)定型心絞痛組（stable angina，SA）、不穩(wěn)定型心絞痛組（unstable angina，UA）、急性心肌梗死組（acute myocardial infraction，AMI）。健康人群組（normal subjects，NS）選擇2011-9月～2012年2月到我院體檢人群共15例，平均年齡為21±3。各組在性別構(gòu)成比上無統(tǒng)計學(xué)差異。所有研究對象均排除糖尿病、甲狀

8、腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減低等內(nèi)分泌代謝疾病、感染、惡性腫瘤、腦卒中、肝腎功能不全、創(chuàng)傷、血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、服用免疫抑制劑者。在實驗前，完成對所有受試對象進(jìn)行記錄臨床資料，并評價受試對象冠心病危險因素。
　　二、外周血紅細(xì)胞CR1表達(dá)、CR1與IC結(jié)合效率、紅細(xì)胞上MDA-LDL表達(dá)、血漿LDL-IC濃度、C3濃度等檢測
　　對符合試驗入選標(biāo)準(zhǔn)的受試對象采集靜脈血標(biāo)本（采集于 EDTA抗凝管中），立即送到我院檢驗科

9、進(jìn)行血常規(guī)分析，根據(jù)血常規(guī)結(jié)果取部分抗凝全血稀釋成3×105個紅細(xì)胞/100ul，立即利用流式細(xì)胞術(shù)檢測紅細(xì)胞CR1表達(dá)量、CR1與IC結(jié)合效率、紅細(xì)胞上 MDA-LDL表達(dá)；其余標(biāo)本進(jìn)行分離血漿，部分血漿立即送我院檢驗科利用特種蛋白分析儀檢測C3濃度，其余血漿保存于-80℃冰箱，在一月之內(nèi)，利用ELISA檢測血漿中LDL-IC。
　　三、紅細(xì)胞CR1表達(dá)量、CR1-IC結(jié)合效率與血漿中LDL-IC濃度的關(guān)系的初步探討
　　

10、對紅細(xì)胞CR1表達(dá)量、CR1-IC結(jié)合效率與血漿中LDL-IC濃度作相關(guān)分析。
　　研究結(jié)果：
　　一、各組受試對象冠心病危險因素的評價
　　1.1、年齡、性別：在年齡構(gòu)成上，NCA組（58±9）、SA組（65±11）、UA組（71±8）、AMI組（69±12）均明顯大于NS組（21±3），P<0.05；在性別構(gòu)成比上，各組間無顯著性差異，P>0.05。
　　1.2、高血壓：與NS組（0/15）相比較，NCA組(

11、9/15)、SA組(7/9)、UA組(10/15)、AMI組(2/7)均有更高的高血壓病患病率，P<0.05。
　　1.3、吸煙史：與NS組(0/15)相比較，NCA組(5/15)、SA組(4/9)、UA組(5/15)、AMI組(3/7)均有更高比例的吸煙人群，P<0.05。
　　1.4、血脂水平：在甘油三酯（triglyceride，TG）水平上,SA組（2.34±1.18）、UA組（1.89±1.38）較NS組（1.27

12、±1.37）明顯增高，各自P值均<0.05,NCA組（1.53±0.93）及AMI組（0.93±0.44）TG水平較NS組無顯著性差異，P>0.05；各組在總膽固醇（total cholesterol，TC）水平、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平均無顯

13、著性差異，P>0.05。
　　各項指標(biāo)提示CP患者存一種或多種冠心病危險因素。
　　二、外周血紅細(xì)胞CR1表達(dá)、CR1與IC結(jié)合效率、紅細(xì)胞上MDA-LDL表達(dá)、血漿LDL-IC濃度、C3濃度
　　2.1、紅細(xì)胞 CR1表達(dá)量：紅細(xì)胞 CR1表達(dá)量以平均熒光強度(mean fluorescence intensity，MFI）表示，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NCA組MFI（9.85±2.32）、SA組MFI（9.69±1.20）、UA

14、組MFI（9.92±1.97）均較NS組MFI(12.07±1.96)降低，P<0.05；AMI組MFI(10.60±2.66)與NS組MFI無顯著性差異，P>0.05。
　　2.2、CR1與 IC結(jié)合效率：CR1與 IC結(jié)合效率以平均紅細(xì)胞上結(jié)合帶熒光標(biāo)記IC（mean fluorescence intensity of binding IC on erythrocyte，MFI-IC）的熒光強度表示,結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SA組 MFI-

15、IC（69.56±46.44）、UA組 MFI-IC（61.19±32.44）、AMI組MFI-IC（62.50±43.52）較NS組MFI-IC（112.86±63.47）降低，P<0.05；NCA組MFI-IC（83.54±45.13）與NS組MFI-IC無顯著性差異，P>0.05。
　　2.3、紅細(xì)胞上 MDA-LDL表達(dá)：紅細(xì)胞上 MDA-LDL表達(dá)以平均熒光強度（mean fluorescence intensity o

16、f binding MDA-LDL on erythrocyte，MFI-MDA）表示,分析結(jié)果顯示各組檢測管與相應(yīng)的同型對照管相比較均無顯著性差異，P>0.05，提示各試驗組紅細(xì)胞上并無結(jié)合MDA-LDL或MDA-LDL免疫復(fù)合物。
　　2.4、血漿LDL-IC濃度：血漿中LDL-IC濃度以光密度（optical density，OD）值表示，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NCA組(0.43±0.15)、SA組（0.52±0.14）、UA組（0.5

17、0±0.23）、AMI組（0.54±0.35）OD值均與NS組（0.42±0.22）OD值無顯著性差異，P>0.05。
　　2.5、血漿C3濃度：C3濃度以各組間中位數(shù)表示，分析結(jié)果顯示，NCA組(0.97)、SA組（1.20）、UA組（1.07）、AMI組（1.10）均與NS組（1.02）血漿C3濃度無顯著性差異，P>0.05。
　　三、紅細(xì)胞CR1表達(dá)量、IC結(jié)合效率與血漿中LDL-IC濃度關(guān)系的初步探討
　　對各

18、組紅細(xì)胞CR1表達(dá)量MFI、IC結(jié)合效率MFI-IC與血漿中LDL-IC濃度OD值采用Pearson或Spearman相關(guān)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組MFI與OD值不存在統(tǒng)計學(xué)意義上的相關(guān)，P>0.05；各組MFI-IC與OD值同樣不存在統(tǒng)計學(xué)意義上的相關(guān)，P>0.05。
　　結(jié)論：
　　1、在CP患者中，紅細(xì)胞CR1表達(dá)量（除AMI組外）及與IC結(jié)合效率（除NCA組外）降低，可能導(dǎo)致與AS相關(guān)IC未能得到有效清除，最終加速AS的進(jìn)