金釵石斛多糖對高糖誘導的大鼠腎系膜細胞氧化應激及Nrf2表達的影響.pdf

1、目的：觀察金釵石斛多糖對高糖作用下大鼠腎小球系膜細胞(HBZY-1)氧化應激及Nrf2蛋白表達的影響，并初步探討其可能參與的作用機制。
　　 方法：1.采用水提醇沉法進行多糖的提取并經過DEAE-FF對提取粗多糖進行進一步的分離純化；鑒定方法包括紅外光譜分析該多糖的特征性吸收峰；紫外分光光度法對多糖純度進行判定；苯酚-硫酸法進行多糖含量測定。2.將HBZY-1細胞分為正常對照組(NC)、高糖作用組(HG)、NAC作用組(NA)、

2、金釵石斛多糖低(LD)、中(MD)、高(HD)劑量組，藥物作用時間24h，ABTS法檢測各組細胞的總抗氧能力；流式細胞術檢測細胞內活性氧的變化；WST-1法檢測各組細胞的增殖情況。3.熒光定量PCR檢測Nrf2mRNA、NQO1mRNA的表達。免疫熒光觀察細胞內Nrf2表達與核轉位的情況。免疫印跡檢測細胞內Nrf2蛋白表達情況。
　　 結果：1.經水提醇沉及陰離子交換柱純化得到金釵石斛多糖組分FDP1，測得金釵石斛多糖相對含量為

3、98.1％。2.與正常對照組相比，高糖模型組細胞的總抗氧能力下降，而ROS表達明顯增加(P<0.05)。金釵石斛多糖FDP1作用組與高糖組相比，均可以一定程度的遏止細胞內抗氧化能力的衰減與ROS生成水平的增加。另外高糖組較正常對照組細胞的增殖速度加快(P<0.05)，而金釵石斛多糖各劑量組均對于高糖誘導的增殖沒有影響。3.與高糖模型組相比，金釵石斛多糖低中高劑量組均能明顯上調Nrf2mRNA、Nrf2蛋白的表達(P<0.05)，并促進細