大菱鲆鈣激活型鉀離子通道TSKCa基因的克隆和時(shí)空表達(dá)特征.pdf

1、國家海洋局第一海洋研究所碩士學(xué)位論文大菱鲆鈣激活型鉀離子通道TSKCa基因的克隆和時(shí)空表達(dá)特征姓名：韓光申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：海洋生物指導(dǎo)教師：黃曉航20070601大菱鲆鈣激活型鉀離子通道TSKCa基因的克隆和時(shí)空表達(dá)特征大菱鲆鈣激活型鉀離子通道TSKCa基因的克隆和時(shí)空表達(dá)特征摘要離子通道是位于細(xì)胞膜表面的一種膜蛋白，為各種無機(jī)離子跨膜運(yùn)輸提供通路。離子通道的主要功能是通過啟閉通道控制離子進(jìn)出細(xì)胞，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，激活細(xì)胞

2、內(nèi)各種重要的生理活動(dòng)。在動(dòng)物免疫應(yīng)答過程中，離子通道調(diào)控免疫細(xì)胞的激活與增殖，啟動(dòng)細(xì)胞的免疫反應(yīng)。因此，離子通道對(duì)維系動(dòng)物免疫系統(tǒng)的正常功能起著非常重要的作用。長期以來的研究發(fā)現(xiàn)離子通道是多種新藥的作用靶點(diǎn)，因此對(duì)離子通道的研究始終是生物醫(yī)學(xué)界的前沿領(lǐng)域。鈣激活型鉀離子通道(KCa)是位于免疫細(xì)胞細(xì)胞膜表面調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的一類重要的通道。通過比較GenBank中不同KCa基因的同源相似性，設(shè)計(jì)出特異性引物，以我國海水養(yǎng)殖大菱鲆(Seoph

3、thalmusmaximusL)血液eDNA為模板利用RTPCR技術(shù)克隆獲得了一條基因片段。使用生物信息學(xué)手段對(duì)該基因片段序列進(jìn)行了比對(duì)和分析，證實(shí)該片段屬小電導(dǎo)鈣激活型鉀通道基因(sKca)家族。設(shè)計(jì)巢式PCR引物通過5’m∞克隆得到了該基因的5’端序列，通過3’race克隆得到了該基因的3’端序列，通過生物學(xué)軟件拼接合成三段序列得到了大菱鲆TSKCa基因的全長序列。TSKCa基因序列全長為1698bp，其中開放閱讀框長度為1632b

4、p，編碼的TSKCa蛋白有544個(gè)氨基酸。使用生物信息學(xué)軟件將TSKCa蛋白與GenBank中已有的SKCa蛋白進(jìn)行同源性分析，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，使用SeqFaet和DAS服務(wù)器對(duì)TSKCa蛋白進(jìn)行跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測，并且根據(jù)已有的研究結(jié)果推測TSKCa蛋白的結(jié)構(gòu)，推斷出TSKCa蛋白由S1s6六個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)孔道區(qū)(P區(qū))組成。鑒于對(duì)SKCa基因在魚類免疫應(yīng)答中的作用研究報(bào)道很少，對(duì)克隆得到的TSKCa基因在大菱鲆不同器官組織的表達(dá)以及在