TRAIL在重癥大皰型藥疹角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡中作用的研究.pdf

1、背景:角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡是重癥大皰型藥疹（SBDE，包括SJS(史蒂文斯-約翰遜綜合征)和TEN（中毒性表皮壞死松解癥））早期關(guān)鍵事件。其免疫機(jī)制涉及CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞等參與的細(xì)胞毒作用;而TN F-α、sFasL、granulysin（顆粒溶素）等細(xì)胞因子參與了凋亡作用的放大，現(xiàn)認(rèn)為后者的作用可能更為重要。TRAIL（腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體）及其受體DR（死亡受體）4、DR5現(xiàn)認(rèn)為是死亡受體相關(guān)凋亡中一條重要的通

2、路，但在本病中研究較少，對(duì)其深入研究有助于闡明重癥大皰型藥疹發(fā)病的免疫機(jī)制。
　　目的:從皮膚組織、皰液及外周血三個(gè)層面，研究角質(zhì)形成細(xì)胞TRAIL及其受體的表達(dá)、皰液中細(xì)胞及外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC) TRAIL的表達(dá);分析sTRAIL(可溶性TRAIL)及本病中其他凋亡相關(guān)的細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin在皰液及外周血中的濃度;并在HaCaT細(xì)胞中參照上述細(xì)胞因子濃度研究其對(duì)sTRAIL誘導(dǎo)

3、角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡的影響，以期探索SBDE發(fā)病機(jī)制。
　　方法:1.免疫組化檢測(cè)SJS/TEN中的角質(zhì)形成細(xì)胞TRAIL及DR4、DR5的表達(dá)。
　　2.Weste rn-Blot和RT-PCR檢測(cè)SJS/TEN患者皰液中細(xì)胞TRAIL的表達(dá)(蛋白和mRNA);用流式細(xì)胞儀分析皰液中細(xì)胞表型，并與TRAIL的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　3.Western-Blot和RT-PCR檢測(cè)SJS/TEN患者PBMC中TRAIL的表

4、達(dá)，并與皰液中細(xì)胞比較。
　　4.ELISA檢測(cè)皰液中的細(xì)胞因子sTRAIL、IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin濃度并與外周血比較。
　　5.培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞。流式細(xì)胞儀An nexinⅤ-FITC/PI法檢測(cè)sTRAIL單獨(dú)及與IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin分別組合后的誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡作用，并進(jìn)行比較。
　　6.通過(guò)細(xì)胞爬片及免疫組化，分析上述細(xì)胞因子對(duì)HaCa

5、T細(xì)胞TRAIL及DR4、DR5表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:1.在20例SJS/TEN皮膚組織中發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞高表達(dá)TRAIL及DR4、DR5，并且在浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞中也有表達(dá)，較10例發(fā)疹型藥疹對(duì)照有顯著差異。
　　2.在10例SJS/TEN皰液中細(xì)胞檢測(cè)到TRAIL的高表達(dá)（蛋白和mRNA），較9例對(duì)照（白癜風(fēng)表皮移植患者供皮區(qū)大皰）有顯著差異，但表達(dá)有逐漸下降的趨勢(shì);同時(shí)皰液中CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞比例下降而CD14+細(xì)

6、胞增多，經(jīng)多重回歸分析發(fā)現(xiàn)TRAIL表達(dá)主要與CD8+T細(xì)胞有關(guān)。
　　3.在15例SJS/TEN PBMC檢測(cè)到TRAIL的表達(dá)低于皰液中細(xì)胞，但高于10例正常人及發(fā)疹型藥疹PBMC對(duì)照，且表達(dá)相對(duì)皰液中細(xì)胞穩(wěn)定。
　　4.sTRAIL、IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin在SJS/TEN皰液中濃度高于外周血濃度，后者也高于10例正常人及發(fā)疹型藥疹血清對(duì)照。但sTRAIL、IFN-γ、TNF-α濃度相對(duì)

7、穩(wěn)定而sFasL、granulysin濃度下降很快。
　　5.HaCaT細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)sTRAIL單獨(dú)對(duì)HaCaT細(xì)胞凋亡作用弱。僅TNF-α在皰液中濃度情況下表現(xiàn)出較強(qiáng)的誘導(dǎo)凋亡作用。但I(xiàn)FN-γ、TNF-α與sTRAIL存在協(xié)同作用而sFasL、granulysin無(wú)相關(guān)性，IFN-γ表現(xiàn)更為明顯。
　　6.IFN-γ、TNF-α可上調(diào)HaCaT細(xì)胞TRAIL及DR4、DR5的表達(dá)，IFN-γ上調(diào)DR5表達(dá)的作用更明顯。<

8、br>　　結(jié)論:我們?cè)赟JS/TEN皮膚組織、皰液及外周血中均發(fā)現(xiàn)TRAIL的活化。PBMC中高表達(dá)TRAIL，血清sTRAIL的濃度也升高，意味著TRAIL也參與了本病的全身反應(yīng);而趨化至SJS/TEN皮膚組織的皰液細(xì)胞，尤其是早期的CD8+T細(xì)胞，TRAIL表達(dá)增強(qiáng)，可能通過(guò)直接結(jié)合或以高濃度的sTRAIL來(lái)誘導(dǎo)高表達(dá)DR4、DR5的角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡;角質(zhì)形成細(xì)胞同時(shí)高表達(dá)TRAIL及DR4、DR5表明其在本病中不是單純的“受害者”