缺血預(yù)適應(yīng)對(duì)小腸缺血再灌注損傷后c-fos-c-jun基因表達(dá)的影響及其保護(hù)作用.pdf

1、研究背景及目的： 小腸移植是治療不可逆性小腸功能衰竭的最佳療法，但其5年存活率一直很低。小腸是慢性移植物失功(clironic graft dysf：unction，CGD)高發(fā)早發(fā)的器官，也是對(duì)缺血再灌注損傷(iscllemia/reperfusioninjury，IRI)最敏感的器官之一。IRI是導(dǎo)致小腸CGD發(fā)生發(fā)展的重要因素，缺血預(yù)適應(yīng)(isclneroic preconditioning，IPC)被公認(rèn)為是當(dāng)前防治IR

2、I最有希望和應(yīng)用前景的療法，但I(xiàn)PC在臨床上對(duì)小腸是否有保護(hù)作用仍存在爭(zhēng)論。轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1(activator protein-1，AP-1)(c-fos和c-iun)參與細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化、細(xì)胞凋亡等病理生理過程。本研究旨在通過小鼠小腸IRI模型探討IPC對(duì)小腸IRI的保護(hù)作用，并觀察這一過程中c-fos和c-iun的變化，探討c-fos和c-jun在小腸IRI和IPC中的作用機(jī)制。 方法： 建立雄性C57BL

3、/6小鼠小腸IRI模型，分為sham組(假手術(shù))、IRI組(單純IRI)和IPC組(IPC+IRI)3組。采集3組術(shù)后再灌注0，30，60，90，120min小腸組織，HE染色觀察不同時(shí)間點(diǎn)小腸病理變化；RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)c-fos和c-iun的mRNA表達(dá)；免疫組織化學(xué)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)小腸組織的c-Fos、c-Jun、PCNA、Caspase-3蛋白表達(dá)；TUNEL法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)小腸上皮細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：

4、HE染色示正常小腸組織切片中小腸絨毛排列規(guī)則，粘膜上皮完整，絨毛無水腫變性或壞死。IRI組再灌注90分鐘后可見粘膜及絨毛水腫、排列紊亂，絨毛縮短，粘膜上皮壞死，脫落；IPC組再灌注90分鐘后，小腸絨毛結(jié)構(gòu)尚可，排列輕度紊亂，少量粘膜上皮壞死脫落，且較IRI組輕。 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示正常小腸組織c-los和c-iun mRNA呈低表達(dá)。與對(duì)照組相比，IRI組小腸組織中c-fos mRNA隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)其表達(dá)強(qiáng)度不斷上升，再

5、灌注30min時(shí)達(dá)峰，之后開始下降；IRI組小腸組織中c-iun mRNA也隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)其表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)，再灌注60min時(shí)達(dá)峰，隨后下降。IPC組小腸組織中c-los與c-iunmRNA變化趨勢(shì)與IRI組類似，但峰值明顯低于IRI組，且有顯著性差異(p<0.05)。 免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示IRI組再灌注30-120min和IPC組再灌注60-120min c-Fos分子表達(dá)均高于對(duì)照組(p<0.05)；IRI組再灌注30min

6、和60min時(shí)c-Fos分子表達(dá)明顯高于IPC組(p<0.05)。IRI組和IPC組c-Jun分子表達(dá)隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)不斷增強(qiáng)，再灌注60-120min均明顯高于對(duì)照組(p<0.05)；但I(xiàn)PC組增幅較IRI組低，再灌注60-120min兩組間c-Jun分子表達(dá)有顯著性差異(p<0.05)。IRI組PCNA于再灌注30min表達(dá)迅速增強(qiáng)(p<0.05)，60min達(dá)峰(p<0.05)，后下降；IPC組中PCNA表達(dá)也隨再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)而

7、不斷增強(qiáng)，但再灌注30min和60min時(shí)其表達(dá)明顯低于。IRI組(p<0.05)。隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)，IRI組和IPC組Caspase-3分子的表達(dá)不斷增強(qiáng)，再灌注90-120min顯著高于對(duì)照組(p<0.05)，但I(xiàn)PC組顯著低于IRI組(p<0.05)。 TUNEL染色顯示與對(duì)照組相比隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)，IRI組和IPC組的凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)不斷升高，IRI組再灌注90-120min的AI是對(duì)照組的10-

8、22倍(p<0.05)， IPC組再灌注90-120min的AI值高于對(duì)照組(p<0.05)，但明顯低于IRI組(p<0.05)。 結(jié)論： IRI促使小腸粘膜上皮在再灌注30rain和60min時(shí)c-fos和c-junmRNA先后分別達(dá)峰。推測(cè)再灌注30min時(shí)，大量fos/jun二聚體復(fù)合物形成，促進(jìn)細(xì)胞增殖；而再灌注60min時(shí)，大量jun/jun二聚體復(fù)合物形成，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。PCNA結(jié)果提示IRI早期增生活躍，T