人巨細(xì)胞病毒臨床病毒株UL148基因編碼蛋白抗體制備及其免疫原性研究.pdf

1、目的:
　　制備人巨細(xì)胞病毒（HCMV）臨床病毒株UL148基因的抗體并對(duì)其進(jìn)行免疫原性分析。
　　方法：
　　1.應(yīng)用生物信息學(xué)方法，以HCMV臨床病毒株D2 UL148基因氨基酸序列為基礎(chǔ)，采用SOPMA、GOR、HNN方法預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)合跨膜結(jié)構(gòu)、Hopp& Woods親水性方案、Zimmerman極性方案、Emini可及性方案、Jameson-Wolf抗原性方案及柔韌性參數(shù)綜合預(yù)測(cè)UL148基因B細(xì)胞表位。<

2、br>　　2.化學(xué)合成法合成3條HCMV UL148基因分值較高的抗原多肽，并予免疫新西蘭大白兔（經(jīng)初次免疫及加強(qiáng)免疫后）獲取免疫兔血清，飽和硫酸銨沉淀法純化兔血清中相應(yīng)多肽抗體，并用間接Elisa法鑒定3條多肽在不同免疫時(shí)間的抗體效價(jià)及免疫原性。
　　3.將 HCMV病毒接種于生長(zhǎng)狀態(tài)良好的人包皮成纖維細(xì)胞（HFF），提取病毒感染后的細(xì)胞總蛋白，采用Western Blot免疫沉淀法鑒定HCMV UL148基因相應(yīng)抗體反應(yīng)的特異

3、性及敏感性。
　　結(jié)果：
　　1.綜合多種預(yù)測(cè)方法，HCMV UL148基因265-275、221-229、18-25位氨基酸序列區(qū)域內(nèi)或其附近主要以無規(guī)則卷或β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)為主，且抗原指數(shù)較高，確定P1(HCMV UL148265-275)、P2（HCMV UL14818-25）、P3（HCMV UL148221-229）為HCMV UL148基因候選B細(xì)胞表位。
　　2.合成的3條多肽于1w、3w、5w不同時(shí)間段免疫

4、新西蘭大白兔，經(jīng)初次免疫（1w）及加強(qiáng)免疫（3w、5w）后可明顯誘導(dǎo)新西蘭大白兔免疫血清抗體滴度增高；經(jīng)間接Elisa法檢測(cè)可得3條多肽均能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，抗體效價(jià)隨著免疫次數(shù)增加而升高，最高達(dá)1：12800以上。
　　3.經(jīng)Western Blot免疫沉淀法鑒定，感染HCMV后的人包皮成纖維細(xì)胞能與P3多肽（HCMV UL148221-229）誘導(dǎo)的新西蘭大白兔的抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)，與P1、P2呈陰性反應(yīng)。
　　結(jié)論：