重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)小鼠胃癌抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的：胃癌是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤，其發(fā)病率位居所有惡性腫瘤的第2位。手術(shù)是胃癌的首選治療方法，但大部分患者就診時(shí)已失去了手術(shù)的機(jī)會(huì)，即使手術(shù)后的患者局部復(fù)發(fā)率仍高達(dá)80％，因此對(duì)于無(wú)法手術(shù)切除的胃癌或轉(zhuǎn)移性胃癌，化療已經(jīng)成為常規(guī)治療。目前晚期胃癌的化療仍然缺乏一致公認(rèn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”方案，臨床常用的治療方案效果仍不令人滿意。大量研究證明腫瘤的生長(zhǎng)依賴血管的形成，基于此理論，抗腫瘤血管治療成為一種新的治療方法，其與傳統(tǒng)藥物相比具有低毒，

2、抗瘤譜廣，不易產(chǎn)生耐藥等優(yōu)點(diǎn)。內(nèi)皮抑素是目前發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖抑制因子，體外實(shí)驗(yàn)證明能特異的抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，而對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。在臨床前腫瘤模型中，能夠抑制多種腫瘤的生長(zhǎng)，并降低腫瘤的血管生成。
　　 研究表明，單獨(dú)應(yīng)用抗血管治療進(jìn)展期腫瘤作用有限。近來(lái)化療聯(lián)合抗血管治療受到人們的廣泛關(guān)注，內(nèi)皮抑素聯(lián)合化療治療乳腺癌、肝癌、肺癌等腫瘤模型取得了較好的效果。我國(guó)學(xué)者自主創(chuàng)新研發(fā)的新型重組人血管內(nèi)皮抑素（

3、Endostar，恩度），2005年被我國(guó)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)聯(lián)合NP方案治療非小細(xì)胞肺癌。奧沙利鉑（Oxaliplatin，L-OHP）為第三代鉑類化合物，其作用機(jī)制主要是使腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA形成鏈間和鏈內(nèi)交聯(lián)，從而中斷DNA合成，最終產(chǎn)生細(xì)胞毒和抗腫瘤活性。臨床主要用于治療大腸癌、胃癌、食管癌、卵巢癌等多種腫瘤。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠胃癌模型，研究重組人血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)小鼠胃癌的殺傷效應(yīng)及作用機(jī)制，為臨床應(yīng)

4、用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：通過(guò)在小鼠右腋皮下接種2×106個(gè)MFC前胃癌細(xì)胞，將40只健康的C57小鼠建立小鼠前胃癌腫瘤動(dòng)物模型。將40只荷瘤小鼠隨機(jī)分成4組，對(duì)照組、恩度組、奧沙利鉑組、聯(lián)合組，每組均為10只，對(duì)照組，腹腔注射等量生理鹽水；恩度組，腹腔注射恩度，0.8mg/kg，d1-14；奧沙利鉑組，腹腔注射奧沙利鉑，5mg/kg，d1；聯(lián)合組，腹腔注射恩度和奧沙利鉑，劑量同上。每天觀察小鼠的一般情況，每三天測(cè)量腫瘤體積

5、；一周后處死動(dòng)物，測(cè)量原位腫瘤的重量、體積，計(jì)算抑瘤率，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線；應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色測(cè)定凋亡蛋白Bax、Bcl-2及腫瘤微血管密度（MVD）的表達(dá)。所有計(jì)量資料的數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（（）±s），應(yīng)用SAS9.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)后采用單因素方差分析（SNK-q）檢驗(yàn)，按P<0.05的標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為其有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組小鼠的腫瘤重量及抑瘤率：各組

6、小鼠的腫瘤重量分別為：1.778±0.119g，0.822±0.107g，0.506±0.097g，0.30±0.066g，各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），抑瘤率分別為53.77％，71.54％，83.13％。
　　 2.各組小鼠的腫瘤體積：對(duì)照組腫瘤體積逐漸增大，22天時(shí)體積為1211.15±70.71mm3，治療各組小鼠腫瘤明顯較對(duì)照組生長(zhǎng)緩慢。恩度組腫瘤生長(zhǎng)不明顯，22天時(shí)體積為293.02±53.49mm3。奧

7、沙利鉑組腫瘤體積10天左右開始下降，聯(lián)合組腫瘤體積1周左右開始下降，22天時(shí)體積分別為141.72±44.92mm3、63.90±35.28mm3，聯(lián)合組腫瘤體積下降最明顯，各組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3.腫瘤細(xì)胞凋亡率：各組凋亡率分別為17.38±1.58％、26.79±3.12％、29.61±3.09％、37.92±2.78％，與對(duì)照組相比各用藥組凋亡率明顯增加（P<0.05），聯(lián)合組凋亡率高于恩度組和奧

8、沙利鉑組（P<0.05）。
　　 4.各組腫瘤組織凋亡蛋白的表達(dá)情況：各組Bcl-2蛋白表達(dá)率分別為57.60±6.11％、31.00±5.35％、20.10±3.67％、3.41±3.0％。各組比較均有顯著性差異（P<0.05），各組Bax蛋白表達(dá)率分別為19.2±4.18％、21.1±4.23％、41.7±7.65％、45.9±7.91％，對(duì)照組與恩度組相比無(wú)顯著差異性（P>0.05），奧沙利鉑組與聯(lián)合組相比較無(wú)顯著差異性（

9、P>0.05），奧沙利鉑組、聯(lián)合組與對(duì)照組、恩度組相比較有顯著性差異（P<0.05）。
　　 5.各組腫瘤血管生成的情況：各組MVD分別為4.11±0.86、2.29±0.63、3.38±0.91、1.60±0.61，恩度組與對(duì)照組有顯著性差異（P<0.05），聯(lián)合組與恩度組、奧沙利鉑組有顯著性差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.重組人血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合奧沙利鉑能夠明顯抑制小鼠胃癌移植瘤的生長(zhǎng)。