健脾益陰活血中藥復(fù)方含藥血清對(duì)高糖環(huán)境下RMCs相關(guān)細(xì)胞因子及TGF-β1-Smad2-3信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病病程中常見的微血管并發(fā)癥之一，是糖尿病(diabetesmellitus，DM)的重要死因，其發(fā)病率也逐年增高。糖尿病腎病的早期病理變化為腎小球肥大，毛細(xì)血管基底膜增厚及系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)聚積，晚期主要為腎小球及腎間質(zhì)的纖維化。糖尿病腎病的發(fā)病與多因素有關(guān)，其中諸多細(xì)胞因子因涉及到血流動(dòng)力學(xué)改變、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞增殖、肥大等諸多方面而被認(rèn)為是DN發(fā)病的重要方面。

2、>　　健脾益陰活血中藥復(fù)方已在臨床應(yīng)用多年，對(duì)治療糖尿病腎病取得了良好的治療效果，不僅可降低血脂，改善腎功能，減少尿微量白蛋白(microalbuminuria，MALB)，還可以降低糖尿病腎病模型大鼠一氧化氮水平。研究健脾益陰中藥復(fù)方含藥血清對(duì)高糖環(huán)境下大鼠腎系膜細(xì)胞（RMCs）細(xì)胞因子表達(dá)及TGF-β1/Smad2/3信號(hào)通路的影響，探討中藥復(fù)方治療糖尿病腎病的作用機(jī)制，為臨床的治療工作提供一定的依據(jù)與基礎(chǔ)。
　　方法:12只

3、SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字法分為4組:小劑量中藥組、中劑量中藥組、大劑量中藥組，對(duì)照組，每組3只，灌胃7天后門靜脈取血，分別制備不同濃度含中藥復(fù)方血清和空白血清，并用于培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞。4-甲偶氮唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定中藥對(duì)系膜細(xì)胞的毒性作用及系膜細(xì)胞的增殖抑制作用，從而確定最佳的中藥血清濃度;用最佳濃度大鼠含藥血清及普通大鼠血清培養(yǎng)細(xì)胞，蛋白芯片檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附劑(enzymelinkedimmunosorbentass

4、ay，ELISA)法測(cè)定TGF-β1蛋白表達(dá)，用蛋白免疫印跡(WesternBlotting)及免疫熒光(Immunofluorescence)方法測(cè)定Smad2/3蛋白表達(dá)及磷酸化。
　　結(jié)果:1.不同濃度含藥血清組細(xì)胞存活率與對(duì)照組相比較均無顯著性差異(P＞0.05)，高糖組增值率為對(duì)照組1.40倍(P＜0.05)。與高糖組相比，而各中藥血清組細(xì)胞增殖均明顯下降(P＜0.05);中劑量中藥組、高劑量中藥血清組與低劑量中藥血清組

5、比較，細(xì)胞增殖明顯被抑制(P＜0.05)，中劑量中藥組與高劑量中藥組之間細(xì)胞增殖無明顯差異(P＞0.05)。2.蛋白芯片顯示，與對(duì)照組相比，高糖組中TGF-β1，IL-1，IL-6，TNF-α，VEGF表達(dá)明顯增高;中藥組與高糖組相比，上述因子表達(dá)明顯減少。3.與高糖組相比，含藥血清組TGF-β1的表達(dá)下降(P＜0.05);與對(duì)照組相比，高糖組、甘露醇組及中藥組的總Smad2/3的表達(dá)均無明顯變化;高糖組p-Smad2/3的表達(dá)明顯增高