ox-LDL對VSMC表達(dá)SDF-1α的影響及其對VSMC和SPC趨化作用的研究.pdf

1、目的：
　　 1、探討氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）對小鼠血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α(SDF-1α)的影響；
　　 2、比較VSMC的條件培養(yǎng)液及SDF-1α對血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）和平滑肌祖細(xì)胞（SPC）趨化遷移的影響。
　　 方法：
　　 1、組織塊貼壁法培養(yǎng)小鼠主動脈平滑肌細(xì)胞，用免疫組織化學(xué)方法對培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定；
　　 2、ox-LDL與VSMC 共培養(yǎng)，用免疫

2、組織化學(xué)方法、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定VSMC表達(dá)SDF-1α蛋白的變化，用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）測定VSMC表達(dá)SDF-1αmRNA的變化，觀察劑量-時間效應(yīng)；
　　 3、趨化遷移實驗：將含有趨化因子SDF-1α的培養(yǎng)液置于Transwell 小室下室，將VSMC或SPC 懸液置于其上室，共孵育6h后，乙醇固定，高倍鏡下計數(shù)濾膜背面（下室面）的細(xì)胞數(shù)，檢測VSMC的條件培養(yǎng)液及SDF-1α對VSMC和

3、SPC的趨化遷移的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、培養(yǎng)的小鼠血管平滑肌細(xì)胞的純度可以達(dá)到約90％。
　　 2、小鼠血管平滑肌細(xì)胞有基礎(chǔ)水平的SDF-1α的表達(dá)。Ox-LDL的濃度在0～60ng／ml 范圍內(nèi)，作用24h，SDF-1α蛋白的表達(dá)隨ox-LDL 濃度的增加而變化，SDF-1α蛋白表達(dá)的峰值在ox-LDL 濃度為45ng／ml 時，是ox-LDL 濃度為0ng／ml 時的1.4倍。在ox-LDL 濃度為

4、45ng／ml 時，0～48h 范圍內(nèi)，SDF-1α蛋白的表達(dá)變化隨時間的延長而變化，SDF-1α蛋白表達(dá)的峰值在24h，是0h的1.5倍。在ox-LDL 濃度為45ng／ml 時，0～30h 范圍內(nèi)，SDF-1αmRNA的表達(dá)變化隨時間的延長而變化，SDF-1α基因mRNA的峰值在10h，是0h的3.2倍。
　　 3、VSMC的條件培養(yǎng)液及SDF-1α對VSMC和SPC 都具有明顯趨化作用。而且VSMC的條件培養(yǎng)液及SDF-1