Dickkopf4在肝細胞肝癌中低表達及其臨床意義.pdf

1、研究背景及意義：肝細胞肝癌是第五大惡性腫瘤，也是第三大引起腫瘤相關(guān)性死亡的惡性腫瘤。肝細胞肝癌的發(fā)病率有著明顯的性別、地域差異，在我國是最常見的消化道腫瘤之一，我國的肝癌患者約占全球一半以上，已成為威脅我國人民生命健康的重要兇手。作為肝癌中最常見的一種病理類型，肝細胞性肝癌的發(fā)生機制比較復(fù)雜，是一個多因素、多途徑和長期作用的結(jié)果。WNT信號通路是眾多肝癌發(fā)生發(fā)展過程研究中一個重要的方向，因為它在腫瘤的發(fā)生、生長、分化、遷移及凋亡中發(fā)揮了

2、重要的作用，其中最經(jīng)典的要數(shù)Wnt∕beta-catenin通路。DKK（Dickkopf）蛋白家族是一組分泌性糖蛋白，主要包括DKK-1,2,3,4四個成員。作為Wnt通路中的一種重要拮抗因子，DKK蛋白能夠調(diào)控Wnt信號通路的異常表達或激活，從而在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。我們在研究中發(fā)現(xiàn)Dickkopf(DKK)4蛋白可能在正常肝臟組織及癌旁組織中高表達，而在肝癌組織中低表達，這提示DKK4的表達變化或許是肝細胞肝癌發(fā)生發(fā)展的重要

3、分子機制之一。因此，通過研究DKK4在肝細胞肝癌中的表達及其臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系有助于我們進一步明確其發(fā)病機制，考察是否可以將其作為一種原發(fā)性肝癌的臨床標志，并結(jié)合AFP提高肝癌的診斷率以及預(yù)后的判斷。
　　目的：研究Dickkopf(DKK)4在肝細胞肝癌組織中mRNA和蛋白水平的表達情況，以及DKK4與β—catenin在蛋白水平表達關(guān)系，探討DKK4蛋白表達與患者臨床病理特征及預(yù)后生存的關(guān)系，為進一步分子機制研究奠定基礎(chǔ)

4、，同時為將來提高患者早期肝癌和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移診斷率開辟一個新的途徑。
　　方法：45例新鮮肝癌組織及其癌旁組織標本、10例正常肝臟組織標本均取自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟醫(yī)院肝臟外科，采用Real time qPCR（探針法）檢測DKK4在上述組織中 mRNA水平表達情況；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法（Immunohistochemistry，SP法）在上述組織中分別檢測DKK4和β-catenin蛋白表達情況，同時對組織芯片中224例肝癌患者

5、DKK4蛋白水平表達情況進行了檢測，以探討其與肝癌患者臨床病理特征間的關(guān)系，并通過相應(yīng)臨床隨訪分析DKK4蛋白表達情況與患者預(yù)后有無關(guān)系。
　　結(jié)果：Real time qPCR（探針法）結(jié)果顯示DKK4在肝癌組織中mRNA水平表達低于相應(yīng)的癌旁組織（P＜0.05）；這與性別、年齡、腫瘤大小、AFP、包膜完整與否、分化程度、血管侵潤與否等無明顯相關(guān)性（P＞0.05），這一結(jié)果可能與樣本量較少有關(guān)。DKK4蛋白在肝癌組織表達也低于相

6、應(yīng)的癌旁組織（P＜0.05），而其正常肝臟組織中的表達高于其余兩者（P＜0.05），這與mRNA水平表達一致；β-catenin蛋白在肝癌組織中陽性表達率為56.8％，癌旁組織中為31.8%，在肝癌組織中表達高于對應(yīng)的癌旁組織（p＜0.05），β-catenin蛋白與DKK4蛋白表達密切相關(guān)，呈負相關(guān)，r=﹣0.4，p=0.006。DKK4蛋白在腫瘤直徑≤5cm、有包膜的肝癌組織中的表達高于腫瘤直徑＞5cm（P=0.037）、無完整包膜

7、（P=0.025）的肝癌組織，DKK4蛋白表達與性別、年齡、是否合并肝硬化、腫瘤數(shù)目、腫瘤分化程度，血管侵潤與否、TNM分級、AFP水平等無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。DKK4高表達組與低表達組術(shù)后總生存時間的比較顯示：DKK4高表達組的累積術(shù)后總生存時間大于DKK4低表達組（P=0.03），中位生存時間分別為51月和39月，DKK4蛋白高表達肝癌患者預(yù)后生存時間長于低表達者(P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：DKK4

8、mRNA和蛋白水平上肝細胞肝癌組織中低表達，而在癌旁組織及正常肝臟組織中高表達；β-catenin蛋白在肝癌組織中高表達，并且與DKK4蛋白表達密切相關(guān)，呈負相關(guān)關(guān)系，DKK4高表達可能影響β-catenin在細胞核的積累，這與Wnt信號通路中DKK4作用機制相一致；DKK4蛋白高表達肝癌患者預(yù)后生存時間長于低表達者；DKK4蛋白水平的表達水平與患者腫瘤大小、有無包膜具有相關(guān)性，這些說明DKK4可能是一種抑癌基因，有可能在腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)