甲狀腺自身免疫與流產(chǎn)相關(guān)性的臨床與實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、論文一妊娠4-8周母體甲功正常甲狀腺自身免疫與亞臨床甲減對(duì)低危婦女流產(chǎn)影響的前瞻性隊(duì)列研究
　　背景:
　　近20年，單純性甲狀腺自身免疫、亞臨床甲減與不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性成為內(nèi)分泌學(xué)界、圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)界共同關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。研究表明單純性甲狀腺自身免疫、亞臨床甲減可導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局如流產(chǎn)、早產(chǎn);胎兒腦發(fā)育障礙、后代智力水平可能降低，以及產(chǎn)后甲狀腺炎發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加。當(dāng)前，證據(jù)較多的是二者是流產(chǎn)、特別是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的危險(xiǎn)因素。然而，在妊娠

2、早期針對(duì)甲狀腺疾病的低危人群進(jìn)行甲狀腺自身免疫和亞臨床甲減篩查，評(píng)估其對(duì)流產(chǎn)的影響尚未見(jiàn)報(bào)告。
　　目的:
　　本研究旨在觀察妊娠4-8周甲狀腺疾病低危婦女單純性甲狀腺免疫、亞臨床甲減與妊娠20周前發(fā)生流產(chǎn)的相關(guān)性。
　　方法:
　　共篩查3315例妊娠4-8周婦女，采集空腹血液標(biāo)本，空腹靜脈促凝血分離血清，測(cè)定甲狀腺功能[TSH和FT4(Free thyroxine)]和甲狀腺自身抗體[甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(T

3、hyroid peroxidase antibody，TPOAb)和甲狀腺球蛋白抗體(Thyroglobulin antibody，TgAb)]?；谏鲜鼋Y(jié)果將研究人群分為4組:(1)甲功正常、甲狀腺自身抗體陰性組(euthyroidism，ET);(2)單純亞臨床甲減組(isolated subclinical hypothyroidism，SCH);該組依據(jù)TSH水平分為兩個(gè)亞組:SCH1組2.5≤TSH＜5.22 mIU/L; S

4、CH2組5.22≤TSH＜10 mIU/L;(3)單純甲狀腺自身免疫組（isolated thyroid autoimmunity，isolated TAI）: TPOAb和/或TgAb陽(yáng)性;(4)亞臨床甲減合并甲狀腺免疫組(SCH+TAI)，該組依據(jù)TSH水平分為SCH+TAI1和SCH+TAI2兩個(gè)亞組。研究終點(diǎn)為妊娠20周前發(fā)生的流產(chǎn)。
　　結(jié)果:
　　1.與ET組相比，SCH2組（7.1 versus2.2％，矯正危

5、險(xiǎn)度[aOR]3.40(95％可信區(qū)間[CI]:1.62-7.15;P=0.002)、isolated TAI組(5.7 vs2.2％，aOR2.71，95％CI1.43-5.12;P=0.003),SCH+TAI1組(10.0 vs2.2％, aOR4.96,95％ CI2.76-8.90;P=0.000)與SCH+TAI2組(15.2 vs2.2％, aOR9.56,95％ CI3.76-24.28;P=0.000)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)均增加，

6、而SCH1組顯示出無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)增加(3.5versus2.2％, aOR1.62,95％ CI0.96-2.73;P=0.083)。
　　2.存在甲狀腺免疫和/或亞臨床甲減的妊娠婦女流產(chǎn)發(fā)生的妊娠周數(shù)較ET組（11.13±3.21周）提前，在SCH1組為（10.79±1.77）周(P=0.046);SCH2組為（9.70±1.47）周(P=0.02);單純性TAI組為（9.91±1.74）周(P=0.033);SCH+T

7、AI1組為（9.59±1.97）周（P=0.022）;SCH+TAI2組為（8.88±1.24）周(P=0.020)。
　　結(jié)論:
　　妊娠4-8周甲狀腺自身免疫、亞臨床甲減婦女流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)增加，且二者使流產(chǎn)發(fā)生的妊娠周數(shù)提前。這兩種情況共存的妊娠婦女發(fā)生流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)最高。
　　論文二甲功正常甲狀腺自身免疫流產(chǎn)動(dòng)物模型的建立
　　背景:
　　研究表明單純性甲狀腺自身免疫可導(dǎo)致妊娠婦女流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)增加，其機(jī)制至今未明。

8、理想動(dòng)物模型的建立是深入研究疾病的發(fā)病機(jī)制、探索有效治療措施的途徑之一。對(duì)于甲狀腺自身免疫的流產(chǎn)動(dòng)物模型曾有相關(guān)報(bào)道，但流產(chǎn)動(dòng)物的甲功檢測(cè)表明出現(xiàn)了甲減或亞臨床甲減的表現(xiàn)，故流產(chǎn)不能除外由甲功改變所致的影響，為此，建立甲功正常的單純甲狀腺自身免疫的流產(chǎn)動(dòng)物模型對(duì)甲狀腺自身免疫導(dǎo)致流產(chǎn)的機(jī)制的研究至關(guān)重要。
　　目的:
　　構(gòu)建甲功正常的單純TgAb陽(yáng)性的甲狀腺自身免疫CBA/J孕鼠流產(chǎn)動(dòng)物模型。
　　方法:
　　

9、本研究以25μg與75μg劑量的小鼠甲狀腺球蛋白(mTg)免疫CBA/J雌鼠，誘導(dǎo)自身免疫性甲狀腺炎動(dòng)物模型，甲狀腺內(nèi)呈淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，體內(nèi)可檢測(cè)到較高滴度TgAb，與Balb/c雄鼠交配，于妊娠13.5天比較各組TgAb、甲狀腺淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分、甲功、胚胎吸收率和受孕率。
　　結(jié)果:
　　1.Con組、25μg與75μg mTg免疫CBA/J孕鼠TSH、TT4各組間無(wú)差異(P＞0.05);
　　2.25μg與75μg

10、mTg免疫CBA/J孕鼠自身免疫性甲狀腺炎發(fā)病率、甲狀腺淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分與Con組相比明顯增加(P＜0.05);25μg與75μg兩組間比較，75μg mTg免疫組較高（58.7％ vs72.1％，P＜0.05）;
　　3.25μg與75μg mTg免疫CBA/J孕鼠血清TgAb滴度均Con組明顯增高;25μg與75μg兩組間比較，75μg mTg免疫組血清TgAb滴度更高，但兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);
　　4.2

11、5μg與75μg mTg免疫CBA/J孕鼠胚胎吸收率較Con組明顯增高(33.3％vs3.1％，P＜0.05)(45.63％ vs3.1％，P＜0.05)，比較25μg與75μg mTg免疫兩組胚胎吸收率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);
　　5.25μg與75μg mTg免疫CBA/J孕鼠受孕率較Con組明顯降低(65.3％ vs93.1％，P＜0.05)(55.63％vs93.1％，P＜0.05)，比較25μg與75μg mTg免

12、疫兩組受孕率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.mTg免疫可以使CBA/J小鼠致甲狀腺自身免疫，在妊娠13.5日仍存在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，免疫后孕鼠胚胎吸收率明顯增加，受孕率降低，但兩個(gè)免疫劑量之間并無(wú)差異;
　　2.mTg免疫后小鼠體內(nèi)均出現(xiàn)較高抗體，免疫劑量增加抗體滴度也增加，但25μg與75μg兩種劑量免疫所產(chǎn)生抗體滴度無(wú)差異;
　　3.75μg mTg免疫CBA/J小鼠可誘導(dǎo)甲功正常單純TgAb

13、陽(yáng)性的自身免疫異基因交配的流產(chǎn)動(dòng)物模型。
　　論文三 PD-1/PD-L1抑制途徑在甲功正常甲狀腺自身免疫誘導(dǎo)小鼠流產(chǎn)中對(duì)母胎耐受的影響
　　背景:
　　無(wú)論是臨床試驗(yàn)，還是動(dòng)物模型，均表明抗體陽(yáng)性的自身免疫性甲狀腺炎與流產(chǎn)相關(guān)，然而，具體機(jī)制尚未闡明。妊娠是一個(gè)精細(xì)而復(fù)雜的生理過(guò)程，類(lèi)似于同種異體移植，作為同種移植物的胚胎在母體內(nèi)存活直至分娩，實(shí)際上反映母體對(duì)胚胎抗原的免疫耐受，這種母胎耐受包括母胎界面免疫耐受及外周

14、免疫耐受，一旦免疫耐受被打破，母體對(duì)胎兒表現(xiàn)為免疫排斥，將導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。程序性細(xì)胞死亡分子-1（programmed cell death-1，PD-1）/程序性死亡配體(programmed celldeath ligand，PD-L)共刺激途徑是近年發(fā)現(xiàn)的負(fù)性共刺激通路，由于其獨(dú)特的抑制功能備受矚目。PD-1（也稱(chēng)CD279），屬于免疫球蛋白超家族成員，表達(dá)較為廣泛。PD-1有PD-L1和PD-L2兩種配體，多項(xiàng)研究表明通過(guò)干預(yù)P

15、D-L2并沒(méi)有觀察到預(yù)期的免疫調(diào)節(jié)作用，而PD-L1（也稱(chēng)B7-H1或CD274）在多種免疫細(xì)胞組成性表達(dá)，在免疫豁免部位，如胎盤(pán)也有表達(dá)，PD-L1的廣泛表達(dá)也提示它對(duì)外周免疫耐受、母胎耐受的形成與維持具有重要意義。
　　目的:
　　本研究旨在觀察PD-1/PD-L1抑制途徑在母體單純性TgAb陽(yáng)性誘導(dǎo)小鼠流產(chǎn)中的作用。
　　方法:
　　以75μg mTg免疫CBA/J雌鼠，誘導(dǎo)異基因交配自身免疫性甲狀腺炎孕鼠

16、流產(chǎn)模型，弗氏佐劑免疫作為對(duì)照組。
　　留取血清，取完整甲狀腺組織，多聚甲醛固定制作石蠟切片蘇木素和伊紅(Hematoxylin and eosin，HE)染色。取胎盤(pán)、脾制成單細(xì)胞，免疫熒光染色、流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)Treg、Th17細(xì)胞及PD-1與PD-L1在上述細(xì)胞中的表達(dá)。實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative Real-Time Reverse Transcripte Polymerase ChainReacti

17、on, real-time RT-PCR)法檢測(cè)叉頭蛋白P3(forkhead box P3，F(xiàn)oxp3)、視黃酸受體相關(guān)孤兒受體γt（Retinoic acid receptor-related orphan receptorγt，RORγt）和白細(xì)胞介素-17(Interleukin-17，IL-17)的信使核糖核酸(Messenger ribouncleicacid，mRNA)在胎盤(pán)、脾細(xì)胞表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　

18、1.mTg免疫CBA/J孕鼠胎盤(pán)Treg細(xì)胞比例低于對(duì)照組，同時(shí)孕鼠胎盤(pán)Foxp3mRNA水平亦低于對(duì)照組(P＜0.05)，而CD4+亞群中CD25Foxp3+細(xì)胞比例在兩組間無(wú)差異(P＞0.05)，CD25Foxp3細(xì)胞在兩組間也無(wú)差異(P＞0.05);mTg免疫CBA/J孕鼠脾臟Treg細(xì)胞比例低于對(duì)照組(P＜0.05)，同時(shí)孕鼠脾臟Foxp3mRNA水平亦低于對(duì)照組（P＜0.05），CD4+亞群CD25-Foxp3+細(xì)胞在兩組間無(wú)

19、差異(P＞0.05)，CD25-Foxp3-細(xì)胞在兩組間也無(wú)差異(P＞0.05)。
　　2.mTg免疫CBA/J孕鼠胎盤(pán)Th17細(xì)胞比例高于對(duì)照組(P＜0.05);mTg免疫CBA/J孕鼠脾臟Th17細(xì)胞比例與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，同時(shí)孕鼠脾臟IL-17 mRNA水平與對(duì)照組相比亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）;mTg免疫CBA/J孕鼠Tre g/IL-17比例在胎盤(pán)增高(P＜0.05)。
　　3.PD-1在

20、mTg免疫CBA/J孕鼠的胎盤(pán)與脾的CD4+T細(xì)胞中表達(dá)的比例增加(P＜0.05)，在CD4+CD25+Foxp3+ Treg細(xì)胞中表達(dá)的比例增加(P＜0.05)，PD-L1在mTg免疫CBA/J孕鼠的脾臟與胎盤(pán)的CD4+T細(xì)胞中表達(dá)的比例降低(P＜0.05)，在CD4+CD25+Foxp3+ Treg細(xì)胞中表達(dá)的比例降低(P＜0.05);mTg免疫CBA/J孕鼠的胎盤(pán)與脾臟的PD-1 mRNA水平亦高于對(duì)照組(P＜0.05)，胎盤(pán)與脾