DNA氧化性損傷的非酶性快速修復(fù)可能存在于細胞中.pdf

1、本文研究了兩種天然多酚類化合物毛蕊花甙(VER)和迷迭香酸(RA)在細胞體系中的修復(fù)作用，證明細胞中也可能存在DNA非酶性快速修復(fù)。用H2O2處理中國倉鼠卵巢細胞(CHO)及其突變株高表達DNA修復(fù)蛋白XRCC1的AA8細胞株來產(chǎn)生DNA的氧化性損傷。結(jié)果顯示高表達XRCC1的細胞(AA8)存活率高于正常表達XRCC1的細胞(CHO)。已知細胞中DNA氧化性損傷主要通過堿基切除修復(fù)(BER)來完成，許多修復(fù)酶參與了這一修復(fù)過程。采用甲氧

2、胺(MX)，3-氨基苯甲酰胺(3AB)或煙酰胺(NIC)來抑制BER中的修復(fù)酶。結(jié)果顯示兩種細胞經(jīng)H2O2處理后，DNA氧化性損傷均可增高2-5倍，RA或VER與細胞溫育后可使DNA氧化性損傷明顯降低。為了排除這種降低是多酚類清除活性氧所致的可能性，將培養(yǎng)液中的RA或VER在加入H2O2之前就徹底清洗掉，僅在細胞內(nèi)保留低濃度多酚。我室從多酚類化合物、DNA和H2O2三者濃度和反應(yīng)速率常數(shù)計算出競爭系數(shù)，該系數(shù)表明多酚類化合物首先修復(fù)DN

3、A氧化性損傷，而不是首先清除活性氧。實測結(jié)果也表明細胞中ROS在實驗全過程一直維持在高水平，ROS并沒有被多酚類清除。所以當修復(fù)酶被抑制后，DNA氧化性損傷的下降不是ROS被清除所致，而應(yīng)是被多酚類非酶性修復(fù)所致。H2O2可以誘導(dǎo)線粒體膜電位的下降，BER抑制劑進一步加劇下降，而RA或者VER能夠緩解這種下降趨勢。前人已發(fā)現(xiàn)線粒體膜電位為維持DNA損傷的修復(fù)能力所必需，表明RA和VER有助于維持修復(fù)能力。結(jié)論：非酶性快速修復(fù)不僅存在于化