多西他賽影響內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為及抑制其遷移機(jī)制的研究.pdf

1、冠狀動(dòng)脈疾?。–AD）一直是威脅人類健康的幾大殺手之一，目前最好的治療手段是在病變部位置入藥物洗脫支架（DESs），可一定程度上減少血管再狹窄的幾率。但臨床結(jié)果表明，DESs雖降低了血管再狹窄，卻大大延遲了支架內(nèi)皮化的時(shí)間，治療效果不理想。究其原因，DESs上攜帶的抗增殖類藥物的使用，這類藥物多為紫杉醇及其衍生物等，他們大多無(wú)細(xì)胞特異性，在抑制中膜細(xì)胞增殖的同時(shí)；也抑制了內(nèi)膜細(xì)胞的增殖，使損傷的內(nèi)膜未能快速修復(fù)。然而這些藥物延遲內(nèi)皮化的

2、詳細(xì)機(jī)理卻不清楚，特別是如何延遲內(nèi)皮細(xì)胞快速遷移至損傷位點(diǎn)的機(jī)制。基于此，本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)為細(xì)胞模型，體外探究紫杉醇的類似物多西他賽（DTX）對(duì)HUVECs的影響及其作用機(jī)制，重點(diǎn)關(guān)注細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遷移的經(jīng)典信號(hào)通路ROCK是否參與了DTX相關(guān)的HUVECs遷移。試圖揭示DTX延遲內(nèi)皮化的原因，探究快速內(nèi)皮化潛在靶點(diǎn)，且為DTX的臨床應(yīng)用提供更廣泛的理論依據(jù)。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1DTX影響HU

3、VECs生物學(xué)行為的濃度依賴性：細(xì)胞增殖結(jié)果表明，中等劑量的DTX（0.5ng/ml，5ng/ml）即可顯著抑制HUVECs的增殖且具有濃度和時(shí)間依賴性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明，高劑量的DTX（50ng/ml）出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞毒性，顯著促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡（包括早期凋亡，晚期凋亡和壞死）；細(xì)胞粘附結(jié)果表明，DTX僅延遲了細(xì)胞的粘附時(shí)間并未影響其粘附總數(shù)；單個(gè)HUVECs（活細(xì)胞工作站）和群體細(xì)胞（劃痕法和transwell法）的運(yùn)動(dòng)和遷移結(jié)果表

4、明，低劑量的DTX（0.05ng/ml）可顯著抑制單個(gè)細(xì)胞和群體細(xì)胞的遷移。表明DTX抑制HUVECs遷移的效應(yīng)更加敏感。
　　2DTX影響細(xì)胞增殖和的凋亡相關(guān)基因的表達(dá)：采用免疫熒光和免疫印跡方法分別對(duì)反映細(xì)胞增殖情況的蛋白PCNA和表征細(xì)胞凋亡的蛋白p53的表達(dá)水平進(jìn)行了定性定量分析。研究結(jié)果表明：DTX濃度愈高，PCNA的表達(dá)越低且p53的表達(dá)越高，說(shuō)明DTX通過(guò)促進(jìn)促凋亡基因p53的表達(dá)加速了細(xì)胞的凋亡，這種效應(yīng)在DTX的

5、濃度為50ng/ml時(shí)最為顯著。
　　3DTX抑制HUVECs遷移的機(jī)制：DTX顯著抑制了黏著斑蛋白Integrinβ1的表達(dá)，降低了ROCK信號(hào)通路中MLC的磷酸化水平，且在ROCK的抑制劑Y-27632預(yù)處理細(xì)胞后這種效應(yīng)愈加顯著，還大大降低了細(xì)胞的遷移數(shù)目。說(shuō)明DTX可能是通過(guò)Integrinβ1-ROCK-（p）MLC信號(hào)通路抑制細(xì)胞的遷移。
　　4DTX影響了HUVECs的功能：免疫熒光和免疫印跡定性定量研究表明，