2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  構(gòu)建含有PON1基因過表達(dá)的重組慢病毒載體,通過在Balb/c小鼠中構(gòu)建PON1過表達(dá)的動物模型,驗證PON1調(diào)控及在小鼠體內(nèi)的表達(dá)效果。觀察調(diào)控PON1基因?qū)硵澄芳毙灾卸竞笮∈蟾螕p傷氧化應(yīng)激水平和炎癥因子指標(biāo)的影響,探討調(diào)控PON1對敵敵畏急性中毒小鼠肝損傷的保護(hù)作用。
  方法:
  1.攜帶PON1基因的慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠的驗證
  12只Balb/c小鼠隨機(jī)分為3組,每組4只:正常對照組、Lv-

2、GFP組、Lv-PON1組。將重組慢病毒載體經(jīng)尾靜脈轉(zhuǎn)染小鼠后,各自連續(xù)0d、1d、3d、5d、7d、9d經(jīng)眼底靜脈叢取血,檢測血清PON1活性水平,通過RT-PCR及Western blot技術(shù)驗證PON1在肝組織中的表達(dá)。
  2.攜帶PON1基因的慢病毒對敵敵畏中毒小鼠肝損傷的影響
  (1).根據(jù)攜帶PON1基因慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠后的表達(dá)效果,選擇在慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠后的第3d對小鼠進(jìn)行敵敵畏染毒。96只Balb/c小鼠隨機(jī)

3、分為4組,每組24只:正常對照組、敵敵畏染毒組、Lv-GFP+敵敵畏組、Lv-PON1+敵敵畏組。將上述各組分為4個亞組,每亞組6只小鼠,分別于6h、12h、24h、48h麻醉處死留取標(biāo)本。
  (2).觀察敵敵畏染毒后各組小鼠的行為變化及攜帶PON1基因慢病毒提前干預(yù)后對小鼠行為的影響,包括:呼吸、流淚、流涎、腹瀉、精神狀態(tài)等;光鏡下觀察肝組織的病理改變。
  (3).化學(xué)比色法檢測血清AST、ALT和AChE活力變化和肝

4、組織MDA、GSH含量;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測小鼠肝組織SOD、CAT、TNF-α、IL-1β水平;RT-PCR法檢測肝組織PON1 mRNA和Nrf2mRNA表達(dá);Western blot法檢測PON1、NF-κBp65蛋白表達(dá)。
  結(jié)果:
  1.攜帶PON1基因的慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠的驗證
  攜帶PON1基因的慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠后,其血清PON1活性在第1d開始緩慢升高,自第3d起維持較高的活性水平;正常對照

5、組和Lv-GFP組血清PON1活性一直處于相對低水平。RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示,Lv-PON1組小鼠肝組織PON1mRNA和PON1蛋白表達(dá)明顯高于正常對照組和Lv-GFP組。
  2.攜帶PON1基因的慢病毒對敵敵畏中毒小鼠肝損傷的影響
  (1).正常對照組小鼠呼吸平穩(wěn),活動自如,未見異常。敵敵畏染毒組小鼠染毒后出現(xiàn)流涎,腹瀉,呼吸急促,步態(tài)不穩(wěn),肌肉震顫,精神萎靡,蜷縮成團(tuán),隨著時間的延長其中毒癥

6、狀逐漸緩解;攜帶PON1基因慢病毒提前干預(yù)后,小鼠的中毒癥狀較敵敵畏染毒組有所減輕。光鏡下,小鼠在敵敵畏中毒后12h肝組織損傷變化最為顯著,攜帶PON1基因慢病毒提前干預(yù)后小鼠肝損傷有所減輕。
  (2).與正常對照組相比,敵敵畏染毒組各時間點肝組織PON1 mRNA和PON1蛋白的表達(dá)均顯著降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與敵敵畏染毒組相比,相應(yīng)時間點Lv-PON1+敵敵畏組肝組織PON1 mRNA和PON1蛋白表達(dá)均

7、明顯升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
  (3).與正常對照組相比,敵敵畏染毒組在染毒后6h、12h、24h血清AChE活力明顯受到抑制(P<0.05)及6h、12h、24h、48h ALT、AST活力均明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與敵敵畏染毒組相比,相應(yīng)時間點Lv-PON1+敵敵畏組的血清AChE活力抑制程度明顯減輕(P<0.05),ALT、AST活力明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),Lv-G

8、FP+敵敵畏組的各項指標(biāo)均無明顯差異(P>0.05)。
  (4).與正常對照組相比,敵敵畏染毒組在染毒后6h、12h、24h小鼠肝組織SOD活力及6h、12h、24h CAT活力和GSH含量均明顯降低(P<0.05),6h、12h、24h、48h小鼠肝組織MDA含量顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),6h、12h肝組織Nrf2mRNA表達(dá)略有下降,隨時間延長Nrf2mRNA表達(dá)逐漸升高(P<0.05);與敵敵畏染毒組相比

9、,Lv-PON1+敵敵畏組在6h、12h、24h、48h SOD活力、GSH含量明顯升高及6h、12h、24h CAT活力明顯升高(P<0.05),6h、12h、24h、48h MDA含量顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),Nrf2mRNA表達(dá)明顯升高(P<0.05),Lv-GFP+敵敵畏組的各項指標(biāo)均無明顯差異(P>0.05)。
  (5).與正常對照組相比,敵敵畏染毒組6h、12h、24h、48h小鼠肝組織NF-κBp

10、65表達(dá)水平和TNF-α、IL-1β水平顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與敵敵畏染毒組相比,Lv-PON1+敵敵畏組在6h、12h、24h、48h小鼠肝組織TNF-α水平的升高程度均有所下降,6h、12h、24h IL-1β水平和NF-κBp65表達(dá)也顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),48h IL-1β和NF-κBp65無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),Lv-GFP+敵敵畏組的各項指標(biāo)均無明顯差異(P>0.05)。

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