ALCL中ALK基因異常及其臨床病理意義的研究.pdf

1、目的：研究間變性大細(xì)胞淋巴瘤(Anaplastic Large Cell Lymphoma，ALCL)中間變性淋巴瘤激酶(hnaplastic lymphoma kinase，ALK)蛋白、ALK mRNA和ALK相關(guān)融合基因的表達(dá)和相互間的關(guān)系及其臨床病理意義，并探討clusterin對間變性大細(xì)胞淋巴瘤的診斷價(jià)值。 方法：收集47例ALCL和對照組淋巴瘤即周圍T細(xì)胞淋巴瘤非特殊型(Peripheral T-cell lymp

2、homa，unspecified，PTCL-u)22例、經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(Classical Hodgkin lymphoma，CHL)21例，所有病例均為福爾馬林固定、石蠟包埋組織。鏡下形態(tài)學(xué)觀察；用免疫組織化學(xué)Envision二步法觀察CD3、CD15、CD30、ALK及clusterin的表達(dá)特征；采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse-translation PCR，RT-PCR)檢測45例ALCL和所有對照組淋巴瘤石蠟包埋組

3、織中ALK mRNA及ALK相關(guān)7種常見融合基因的表達(dá)，以看家基因PGK作為內(nèi)對照檢測RNA質(zhì)量和逆轉(zhuǎn)錄效果；擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測序并分析ALK mRNA和ALK相關(guān)融合基因的序列特征；選其中33例ALCL，應(yīng)用熒光原位雜交方法(Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)檢測ALK相關(guān)融合基因，并與RT-PCR檢測結(jié)果作比較分析。 結(jié)果：(1)ALCL的臨床病理學(xué)特征：ALCL中男性28例，

4、女性19例。原發(fā)結(jié)內(nèi)44例(94％)，結(jié)外3例(6％)，分別為顱骨、右肘、腹部各1例。ALCL發(fā)病年齡3-71歲，中位年齡32歲；其中普通型45例，小細(xì)胞型和淋巴組織細(xì)胞型各1例。(2)免疫組織化學(xué)結(jié)果：ALCL中47例(100％)表達(dá)CD30；31例(66％)表達(dá)CD3；無病例表達(dá)CD15；28例(60％)表達(dá)ALK，其中22例胞核及胞質(zhì)陽性，6例僅胞質(zhì)陽性；38例(81％)表達(dá)clusterin，陽性定位于胞質(zhì)和(或)核旁高爾基體區(qū)

5、。25例(89％)ALK陽性和13例(68％)ALK陰性的ALCL病例表達(dá)clusterin。ALK陽性者中位年齡20歲(3～70歲)，陰性者中位年齡48歲(4～71歲)，陽性者發(fā)病年齡顯著小于陰性者(P<0.01)，ALK陽性與否與發(fā)生部位，性別無關(guān)(P>0.05)。clusterin陽性中位年齡30歲(3～71歲)，陰性中位年齡34歲(4～69歲)，clusterin的表達(dá)與否與年齡、部位和性別均無關(guān)(P>0.05)。對照組PTCL

6、-u中22例(100％)表達(dá)CD3；6例(27％)表達(dá)clusterin；無病例表達(dá)CD30、CDl5和ALK。對照組CHL中10例(48％)表達(dá)CD30；21例(100％)表達(dá)CDl5；3例(14％)表達(dá)clusterin；無病例表達(dá)CD3和ALK；clusterin在ALK陽性及陰性的ALCL中的表達(dá)均顯著高于PTCL-u和CHL的表達(dá)(P<0.05)。(3)RT-PCR檢測結(jié)果：45例ALcL中PGK陽性檢出率為100％，3l例(

7、69％)有ALK mRNA表達(dá)，在這31例病例中25例(81％)檢測到NPM-ALK融合基因，1例(3％)TPM3-ALK融合基因，1例(3％)TPM4-ALK融合基因。所有融合基因PCR產(chǎn)物經(jīng)測序與Genebank進(jìn)行比對證實(shí)。ALK的mRNA表達(dá)組發(fā)病年齡顯著小于無表達(dá)組(P<0.01)，ALKmRNA表達(dá)病例在性別、原發(fā)部位方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，ALK蛋白和ALKmRNA的表達(dá)密切相關(guān)(P<0.01)，并且，ALK

8、蛋白和ALK mRNA的表達(dá)均與ALK融合基因表達(dá)密切相關(guān)(P<0.01)。另外4例ALK蛋白ALK mRNA均陽性者和14例ALK mRNA陰性者均未檢測到7類中任何形式的融合基因(NPM-ALK，TFG-ALK，CLTC-ALK，ATIC-ALK，TPM3-ALK，TPM4-ALK，and MSN-ALK)。對照組PTCL-u和CHL均未檢測到ALK mRNA和7類中任何形式的融合基因(4)FIsH檢測結(jié)果：21例ALK蛋白、ALK

9、 mRNA及NPM-ALK融合基因均陽性的病例中，18例可檢測出明顯的熒光分離信號；4例ALK蛋白表達(dá)陰性，而ALK mRNA及NPM-ALK融合基因均有表達(dá)的病例中，2例可檢測出明顯的熒光分離信號；2例具有TPM3-ALK和TPM4-ALK融合基因的病例，均檢測出明顯的熒光分離信號；4例ALK蛋白和ALKmRNA有表達(dá)，而未檢出何種融合基因病例中，2例可檢測出明顯的熒光分離信號(其中1例可見多對融合及一對分離熒光信號圖像)；2例ALK

10、蛋白、ALK mRNA及NPM-ALK融合基因均陰性性的病例中，檢測出明顯的2對熒光信號臨近或融合成黃色信號。 結(jié)論：(1)ALCL是一類CD30陽性的T細(xì)胞淋巴瘤，是兒童和年輕人較多發(fā)的淋巴瘤類型之一，大多數(shù)ALCL瘤細(xì)胞呈高度異型性，多形性，可有竇內(nèi)生長、細(xì)胞黏附、hallmark cell等特征性的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。(2)ALK蛋白在ALcL中有較高和特異的表達(dá)，是診斷和鑒別診斷ALcL較好的生物學(xué)指標(biāo)。另外，ALK蛋白陽性者發(fā)

11、病年齡顯著小于陰性者，在臨床病理診斷和預(yù)后判斷中可能具有重要意義。(3)與對照組淋巴瘤相比，clusterin蛋白在ALK陽性和ALK陰性的ALCL中均有較高表達(dá)，可作為ALCL診斷和鑒別診斷的新的分子指標(biāo)，特別在ALK陰性的ALcL與PTCL-u和CHL鑒別診斷時(shí)。另外，針對clusterin靶基因治療方法有可能成為ALCL新型的臨床治療手段。(4)應(yīng)用RT-PCR檢測ALK mRNA及ALK相關(guān)融合基因能對ALK蛋白的檢測進(jìn)行有益的