聚乙烯二氨三嗪基氫鍵型基因轉染系統(tǒng)的細胞內化研究.pdf

1、基于乙烯基二氨三嗪單體(VDT)和質粒DNA(pDNA)的腺嘌呤-胸腺嘧啶堿基對間氫鍵的相互作用，我們實驗室前期成功構建了PVDT基新型氫鍵型非病毒轉基因載體。在前期實驗的基礎上，本論文中，我們進一步考察PVDT基聚合物/pDNA復合物性質，瓊脂糖凝膠電泳驗證了載體與pDNA復合的氫鍵型特征。復合物的表面電荷和復合物粒徑測量顯示PVDT基聚合物可以覆蓋pDNA的表面電荷，形成略帶負電或電中性的復合物；也發(fā)現(xiàn)隨著復合比增加，復合物粒徑先減

2、小再增大，這是由于兩個因素造成的：更多的PVDT基聚合物能夠壓縮pDNA到更加緊密的狀態(tài)，中性的復合物粒子不穩(wěn)定容易相互聚集。在細胞內化攝入的研究中，chlorpromazine和filipin III能夠分別抑制網(wǎng)格蛋白控制的內吞作用和細胞膜穴樣內陷控制的內吞作用。兩種抑制劑的抑制結果表明，PVDT基聚合物采用一種非網(wǎng)格蛋白、非細胞膜穴樣內陷控制的內吞方式被COS-1細胞內化吸收。對這種內吞方式進行溫度抑制實驗和動力學實驗進行進一步考