細(xì)胞穿透肽及類似物增強(qiáng)可體內(nèi)降解聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染效率的研究.pdf

1、本文主要探討了幾種修飾方法對提高聚乙烯亞胺(PEI)及其衍生物基因載體細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的影響。在各種非病毒載體中，25kDa分枝型PEI是迄今為止轉(zhuǎn)染效率最高的陽離子聚合物之一，現(xiàn)已被做為新開發(fā)的基因轉(zhuǎn)染載體的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，但其在體內(nèi)不可降解，細(xì)胞毒性較大。為降低其細(xì)胞毒性，我們用無細(xì)胞毒性的小分子量PEI(如2000Da)合成了一系列可體內(nèi)降解的PEI衍生物；因PEI表面帶有大量的易被化學(xué)修飾的伯胺，我們把骨架改造和表面修飾結(jié)合起來，在降低細(xì)

2、胞毒性的同時(shí)提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。 首先，我們合成了幾種可降解的PEI衍生物，并用環(huán)糊精(CD)對聚合物進(jìn)行修飾，改善聚合物的水溶性。其次，用細(xì)胞穿膜肽R8修飾25kDa PEI，提高了轉(zhuǎn)染效率。而R8用于基因傳遞主要是依賴于其側(cè)鏈胍基基團(tuán)，我們進(jìn)一步采用精氨酸及胍基化試劑對聚合物進(jìn)行修飾。對這些聚合物進(jìn)行了水溶性評價(jià)，然后以293和A549細(xì)胞為受體，增強(qiáng)綠色熒光蛋白質(zhì)粒(EGFP)為報(bào)告基因進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的研究。篩選出幾種轉(zhuǎn)染

3、效果好的聚合物，其中CD化修飾后的聚合物中對A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率最高的達(dá)到了69％，胍基化修飾后的聚合物中對A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率最高的(P8)達(dá)到了92％，分別是25kDaPEI轉(zhuǎn)染效率的6.9倍和9.2倍。P8對B16F10細(xì)胞和HBZY-1大鼠腎小球系膜細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率也高達(dá)70％左右。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證實(shí)修飾后的聚合物細(xì)胞毒性明顯低于25kDaPEI?？傊?，經(jīng)過此類骨架改造和表面修飾后的PEI衍生物可以作為安全高效的轉(zhuǎn)染試劑在體外轉(zhuǎn)染實(shí)