大鼠妊娠與分娩期盆底肌中Desmin及Dystrophin的表達及意義.pdf

1、目的:
　　1.研究大鼠妊娠與分娩對肛提肌中結(jié)蛋白(Desmin)與抗肌營養(yǎng)不良蛋白(Dystrophin)的分布及其基因表達量的影響。
　　2.研究大鼠妊娠與分娩對盆底肌細胞骨架的影響。
　　3.探討妊娠與分娩在盆底功能障礙性疾病(pelvic floor dysfunction，PFD)發(fā)病機制中的作用。
　　方法:
　　1.研究對象由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供雌性成年未生產(chǎn)過的Wistar大鼠45只

2、，體重180～220g。雄性成年Wistar大鼠10只，體重220～250g。其中隨機選取15只雌性成年未生產(chǎn)過的Wistar大鼠為對照組，其余30只雌性成年未生產(chǎn)過的Wistar大鼠使其受孕并分娩，分為陰道分娩組，產(chǎn)后6天組。
　　2.取材將各組大鼠在麻醉狀態(tài)下，暴露肛提肌，迅速取肛提肌組織約100mg。分為兩塊，生理鹽水洗凈，用濾紙吸干，一塊置于凍存管，立即置-80℃低溫凍存，用于實時熒光定量PCR測定;另1塊置入體積分數(shù)為4

3、％多聚甲醛溶液中固定24h，常規(guī)脫水、石蠟包埋備用。
　　3.采用HE染色及免疫組織化學方法觀察各組肛提肌形態(tài)的變化及Desmin和Dystrophin分布變化。
　　4.采用實時熒光定量PCR檢測各組肛提肌中Desmin和Dystrophin基因表達量的變化。結(jié)果資料采用均數(shù)±標準差（(x)±S）表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，以P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色

4、結(jié)果:HE染色鏡下觀察各組肛提肌切片，其中對照組肛提肌組織均由彼此緊密相連的肌纖維構(gòu)成，為均染的粉紅色，每個肌纖維周邊有多個細胞核，緊靠肌膜內(nèi)表面，肌束間含有膠原纖維、成纖維細胞，血管及神經(jīng)等結(jié)構(gòu)，肌纖維無變性壞死表現(xiàn);而陰道分娩組肛提肌肌纖維較對照組肥大，排列相對稀疏，略微紊亂，可見少部分肌細胞橫截面積大小不一、有萎縮和肥大細胞，局部可見到肌纖維核中心移位、存在散在壞死肌纖維等;產(chǎn)后6天組肛提肌肌纖維排列較緊密，肌纖維無變性壞死表現(xiàn)。

5、
　　2.免疫組化染色結(jié)果:免疫組化Desmin陽性反應位于肌纖維胞漿內(nèi)，而Dystrophin陽性反應則位于肌纖維胞膜。陰道分娩組Desmin的表達與非妊娠組和產(chǎn)后6天組相比明顯減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而Desmin的表達在非妊娠組和產(chǎn)后6天組之間無顯著差異;陰道分娩組Dystrophin的表達較非妊娠組和產(chǎn)后6天組減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，非妊娠組和產(chǎn)后6天組之間無顯著差異。
　　3.熒

6、光實時定量PCR結(jié)果:陰道分娩組Desmin mRNA表達量較非妊娠組、產(chǎn)后6天組明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義，P＜0.05，產(chǎn)后6天組Desmin mRNA表達量與非妊娠組差異無統(tǒng)計學意義;陰道分娩組Dystrophin mRNA表達量較非妊娠組、產(chǎn)后6天組下降，差異均有統(tǒng)計學意義，P＜0.05，而非妊娠組與產(chǎn)后6天組差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　1.在大鼠妊娠分娩期盆底肌纖維形態(tài)發(fā)生改變，并引起Desmin、Dys