表皮葡萄球菌細(xì)胞間粘附素基因功能及表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、該文以對(duì)生物膜陰性的表皮葡萄球菌ATCC1228進(jìn)行全基因組測(cè)序?yàn)榛A(chǔ),通過(guò)其與金黃色葡萄球菌N315,生物膜陽(yáng)性表皮葡萄球菌RP62A進(jìn)行全基因組比較,分析了表皮葡萄球菌生物膜相關(guān)基因,重點(diǎn)研究了細(xì)胞間粘附素基因(ica)的功能,并對(duì)其表達(dá)調(diào)節(jié)進(jìn)行了初步研究.通過(guò)對(duì)金黃色葡萄球菌與表皮葡萄球菌的全基因組比較,發(fā)現(xiàn)表皮葡萄球菌缺乏一系列編碼毒素和侵襲性胞外酶的基因,從遺傳物質(zhì)水平解釋了金葡菌和表葡菌致病能力和致病機(jī)制的差異.比較生物膜陰

2、性表葡菌株ATCC 12228和生物膜陽(yáng)性菌株RP62A全基因組序列,發(fā)現(xiàn)二者高度相似,但在ATCC 12228基因組中ica基因座(ica locus)完全缺失.為驗(yàn)證ica基因與生物膜形成的關(guān)系,采用基因轉(zhuǎn)入的方法研究了ica基因轉(zhuǎn)入對(duì)ica陰性菌株ATCC 12228,HB及TU3298生物膜形成的影響.半定量生物膜形成實(shí)驗(yàn)表明ica基因轉(zhuǎn)入使得三株生物膜陰性菌株均轉(zhuǎn)變?yōu)樯锬り?yáng)性,掃描電子顯微鏡結(jié)果也從形態(tài)上證產(chǎn)ica轉(zhuǎn)化前后菌

3、株生物膜形成的差異.醫(yī)院來(lái)源菌株HB轉(zhuǎn)入ica后其生物膜形成明顯高于共生性表葡ATCC 12228和TU3298菌株ica基因轉(zhuǎn)化菌株的生物膜形成.為闡明ica基因?qū)采员砥暇虏×Φ挠绊?以完成全基因組測(cè)序的ATCC 12228為研究對(duì)象進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn).大鼠中心靜脈插管感染實(shí)驗(yàn)顯示,與ATCC 12228相比,ica基因轉(zhuǎn)入后細(xì)菌引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染率明顯增高,從被感染動(dòng)物每克肝臟,腎臟和心臟組織中檢測(cè)到的細(xì)菌數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于ATCC 122

4、28細(xì)菌攻擊組動(dòng)物相應(yīng)組織中細(xì)菌檢出數(shù).以上結(jié)果提示獲得ica基因可能是共生性表葡菌轉(zhuǎn)化為侵襲性表葡菌的關(guān)鍵因素之一.ica基因在表皮葡萄菌生物膜形成和致病過(guò)程中具有重要作用,但生物膜形成還與環(huán)境因素有關(guān).為研究ica基因的表達(dá)調(diào)控及受環(huán)境因素的影響,以熒光素酶基因?yàn)閳?bào)告基因構(gòu)建了ica啟動(dòng)子活性檢測(cè)系統(tǒng).應(yīng)用該系統(tǒng)通過(guò)檢測(cè)細(xì)菌使熒光素底物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的程度來(lái)反應(yīng)ica的表達(dá)情況,可用于分析ica的表達(dá)調(diào)節(jié)及其機(jī)制的研究.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示i