CD39在普萘洛爾治療血管瘤裸鼠模型中的作用機制探討.pdf

1、 目的：建立嬰幼兒增殖期血管瘤的裸鼠模型,探討CD 39在普萘洛爾治療增殖期血管瘤中的作用機制。方法：將在手術(shù)室無菌條件下手術(shù)切除的嬰幼兒增生期毛細血管瘤新鮮標本,均勻切成小塊(約3.0mm×3.0mm×3.0mm)移植入實驗裸鼠臀背部皮下,每只皮下移植兩個瘤體組織,建立嬰幼兒血管瘤的裸鼠異種移植的動物實驗模型。在移植45天后,將移植組織均成活的60只的實驗荷瘤裸鼠進行隨機對照分組實驗,隨機分為兩個實驗小組：組 A(普萘洛爾治療組),

2、組 B(生理鹽水對照組),每組30只。無菌條件下,分別給予普萘洛爾溶液和生理鹽水灌胃進行干預,隔日一次。在首次給予藥物治療前、治療后7天、14天、21天、28天,使用頸椎脫臼法,分批將實驗裸鼠處死,每次每組隨機處死6只,切取瘤體組織。用游標卡尺分別測量兩組實驗裸鼠移植瘤橫徑b的和最大直徑a,并根據(jù)公式V=π/6×a×b2估算腫瘤體積變化情況；將切取的瘤體組織石蠟包埋,制成切片,進行HE染色,分析瘤體組織特點,同時進行免疫組織化學染色,檢

3、測組織的CD39、Caspase-3和 Ki-67 的表達；TUNEL 法檢測移植瘤組織中的細胞凋亡情況；采用Pearson相關(guān)分析法進行CD39表達光密度值與細胞凋亡的相關(guān)性分析；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測移植瘤組織的ATP濃度；所有的實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析使用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行。結(jié)果：治療前,各組的實驗裸鼠的血管瘤組織都生長良好,組間瘤體的體積無顯著差異(P>0.05)。治療后 7 天、14 天,生理鹽水對照組的血管瘤

4、瘤體體積繼續(xù)生長、增大,而普萘洛爾治療組血管瘤瘤體體積明顯小于生理鹽水對照組(P<0.01)。干預后21天、28天,普萘洛爾治療組瘤體進一步縮小,較前更加明顯,而生理鹽水組裸鼠瘤體也開始不同程度的縮小,但是幅度較小。在鏡下觀測瘤體標本HE染色切片,普萘洛爾治療組瘤體組織血管減少、破壞,管間纖維脂肪組織浸潤,血管內(nèi)皮細胞分散、稀疏、萎縮,血管壁塌陷、變形,管腔有閉塞、破壞征象；而生理鹽水對照組血管瘤瘤體組織毛細血管豐富,密集,未見管腔和血

5、管壁有萎縮、破壞征象。普萘洛爾治療組的CD39光密度(MD)和Ki-67的陽性指數(shù)與生理鹽水對照組相比均有減少,兩組間有顯著差異性(P<0.05)。普萘洛爾治療組的Caspase 3和細胞凋亡指數(shù)明顯高于生理鹽水組,兩組間有顯著差異性(P<0.01)；ELISA法檢測ATP濃度,顯示普萘洛爾治療組高于生理鹽水對照組,兩組之間有顯著差異性(P<0.05)。 CD39 表達與瘤體細胞凋亡呈負相關(guān)(r=-0.649,P<0.01)。結(jié)論：1.