鈣池操縱性鈣內(nèi)流及其功能蛋白TRPC、ORAI和STIM1在人非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)研究.pdf

1、背景：肺癌是一種嚴(yán)重危害人類健康生命的重大疾病，其發(fā)病率及病死率居各類惡性腫瘤前列。新型診治措施的建立依賴于對(duì)肺癌病理機(jī)制的進(jìn)一步研究和認(rèn)識(shí)。鈣離子（Ca2+）是各種細(xì)胞增殖、分化、基因轉(zhuǎn)錄等生命活動(dòng)的重要信使分子，由細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣池(ER)排空信號(hào)所激活、細(xì)胞膜表面的鈣池操縱性鈣通道（SOCC）開(kāi)放所形成的鈣池操縱性鈣內(nèi)流（SOCE）是非興奮細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)Ca2+穩(wěn)態(tài)平衡的重要途徑[1]。文獻(xiàn)報(bào)道[2] [3]，經(jīng)典瞬時(shí)受體電位通道蛋白（

2、TRPC）及鈣釋放激活鈣調(diào)節(jié)蛋白(CRACM，也稱ORAI)等家族成員TRPC1～7和ORAI1～3參與構(gòu)成SOCC?；|(zhì)相互作用蛋白分子1(STIM1)是感受和傳導(dǎo)鈣池排空信號(hào)、激活SOCC的重要信號(hào)分子。過(guò)去關(guān)于SOCE及其相關(guān)功能蛋白的研究主要集中在神經(jīng)系統(tǒng)、血液淋巴系統(tǒng)、心肺血管系統(tǒng)及泌尿系統(tǒng)，近期研究發(fā)現(xiàn)，SOCE的異常與肝癌、乳腺癌、前列腺癌等多種類型腫瘤的進(jìn)展關(guān)系密切，但SOCE與肺癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系還不清楚。
　　

3、 目的：研究人非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織和細(xì)胞中SOCE，及其相關(guān)功能蛋白TRPC、ORAI及STIM1的表達(dá)情況，為將來(lái)深入探討它們?cè)诜伟┎±頇C(jī)制中的功能奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：采用熒光定量PCR及蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)檢測(cè)NSCLC組織及細(xì)胞中TRPC1～7、ORAI1～3、STIM1 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。應(yīng)用鈣熒光染料Fura-2，通過(guò)熒光顯微鏡鈣定量系統(tǒng)測(cè)量肺癌細(xì)胞中的鈣濃度。在用含環(huán)匹阿尼酸和尼非地平的無(wú)鈣生

4、理鹽溶液灌洗細(xì)胞后，通過(guò)監(jiān)測(cè)灌洗液中鈣濃度恢復(fù)所引起的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的增加對(duì)SOCE進(jìn)行評(píng)估。
　　 結(jié)果：1.在已知的七個(gè)TRPC家族成員中，人NSCLC組織選擇性表達(dá)TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6 mRNA，它們的相對(duì)表達(dá)豐度為TRPC1?TRPC6>>TRPC3>TRPC4；不表達(dá)TRPC2、TRPC5和TRPC7 mRNA。2.與正常肺組織相比，各TRPC mRNA在肺癌組織中的表達(dá)水平呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，其中T

5、RPC6 mRNA表達(dá)的降低具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。3.肺癌細(xì)胞主要表達(dá)TRPC1和/或TRPC6 mRNA，低表達(dá)TRPC3和TRPC4 mRNA，不表達(dá)TRPC2、TRPC5和TRPC7 mRNA。4.蛋白質(zhì)免疫印跡對(duì)NSCLC組織和細(xì)胞中高豐度表達(dá)的TRPC1和TRPC6 mRNA進(jìn)行蛋白水平驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)NSCLC組織和細(xì)胞中均表達(dá)TRPC1和TRPC6通道蛋白，在NSCLC組織中TRPC6蛋白表達(dá)水平明顯低于遠(yuǎn)癌正常肺組

6、織(P=0.03)，TRPC1的表達(dá)與正常對(duì)照相比無(wú)差異。5.NSCLC組織表達(dá)ORAI1、ORAI2和ORAI3以及STIM1 mRNA，與正常肺組織相比呈上調(diào)趨勢(shì)，統(tǒng)計(jì)上無(wú)差異。6.熒光顯微鏡鈣測(cè)定系統(tǒng)在肺癌細(xì)胞系和原代肺癌細(xì)胞中均檢測(cè)到SOCE的存在。
　　 結(jié)論：本研究證明人肺癌細(xì)胞存在SOCE。人NSCLC組織選擇性表達(dá)TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6,主要表達(dá)TRPC1和TRPC6；NSCLC組織表達(dá)所