As-,2-O-,3-對(duì)H-,22-細(xì)胞源exosome外泌的影響及其與exosome聯(lián)合應(yīng)用的治療性研究.pdf

1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AsO對(duì)H細(xì)胞源exosome外泌的影響及其與exosome聯(lián)合應(yīng)用的治療性研究姓名：向自武申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：沈宜20090401重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文泌機(jī)制奠定基礎(chǔ)。另外，也觀察exosome與三氧化二砷聯(lián)合應(yīng)用對(duì)小鼠皮下種植性肝癌模型的治療效應(yīng)。方法：1三氧化二砷對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞(H2：)源exosome外泌的影響：用MTT法測(cè)定H22細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，確定三氧化二砷對(duì)H2

2、2細(xì)胞抑制率為10％的藥物濃度，并確立H22細(xì)胞源exosome提取的最佳收集細(xì)胞培養(yǎng)液時(shí)間；采用超速分級(jí)離心和蔗糖密度梯度離心法提取純化exosome；利用Bradford法定量exosome總蛋白；借助熒光探針Fura2和倒置熒光顯微鏡測(cè)Ca2系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞胞內(nèi)Ca2的變化；采用免疫印跡法(Westernblot)檢測(cè)SNARE復(fù)合物相關(guān)蛋白一一syntaxin。2三氧化二砷與小鼠肝癌細(xì)胞(H22)源exosome聯(lián)合應(yīng)用對(duì)小鼠皮下種

3、植性H22肝癌模型的治療性研究：小鼠皮下接種H22細(xì)胞(5x105個(gè)／只)后的第2天開(kāi)始腹腔注射三氧化二砷，1次／天，連續(xù)10d。第4天開(kāi)始皮下注射H22源exosome，每隔4天一次，連續(xù)3次。觀察各組腫瘤生長(zhǎng)情況。于腫瘤細(xì)胞接種后第25天記錄存活率，處死存活小鼠稱取體重并解剖腫瘤稱瘤重，計(jì)算腫瘤抑制率。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組腫瘤組織中CD4、CD8十T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況。結(jié)果：l三氧化二砷對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞(H22)源exosome外泌的