GnRH-I主動(dòng)免疫對(duì)貓生殖功能的影響.pdf

1、GnRH-I（Gonadotrophin releasing hormone，GnRH-I）主動(dòng)免疫可以用于避孕、終止妊娠、動(dòng)物去勢(shì)等。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)GnRH-I主動(dòng)免疫大動(dòng)物豬、牛、羊等的研究較多，在小動(dòng)物貓方面報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)室研制出的GnRH-I試劑已在豬、鼠和犬上做了研究，顯示了很強(qiáng)的免疫作用。本試驗(yàn)以幼齡家貓為研究對(duì)象，探討GnRH-I主動(dòng)免疫對(duì)貓?bào)w重、對(duì)貓血清GnRH-I抗體水平、睪酮和雌二醇濃度、對(duì)貓生殖器官的影響，為該

2、試劑的推廣提供理論依據(jù)。
　　從市場(chǎng)購(gòu)買年齡相近（約12周齡），體重接近（1.0~1.2kg），發(fā)育正常的健康家貓雄性、雌性各10只。隨機(jī)將雄貓、雌貓分別分成兩組，每組各5只，即對(duì)照組（n=5）與免疫組（n=5）。上述貓飼養(yǎng)4周使其適應(yīng)環(huán)境后，即貓16周齡時(shí)，進(jìn)行初次免疫。稱取麥芽糖結(jié)合蛋白—促性腺激素釋放激素六聚體（maltose binding protein-gonadotropin releasing hormone I

3、hexamer，MBP-GnRH-I6）2.5mg或麥芽糖結(jié)合蛋白（maltose binding protein，MBP）2.5mg，將其溶于5mL生理鹽水中，然后用相同體積的Al(OH)3佐劑充分乳化。每只免疫組貓頸部肌肉注射1mL MBP-GnRH-I6，對(duì)照組貓頸部肌肉注射1mL MBP。6周后加強(qiáng)免疫，免疫劑量和免疫方式與初次免疫相同。初次免疫前采血和稱重，以后每4周（28天）采血一次，每2周（14天）稱重一次。取得血樣后立即

4、進(jìn)行離心，3000r/min離心20min，獲得的血清保存在-20℃冰箱中，以備檢測(cè)。用ELISA測(cè)定血清GnRH-I抗體水平，用放射免疫分析法檢測(cè)雄貓的睪酮水平和雌貓的雌二醇濃度。28周齡時(shí)，手術(shù)摘除所有試驗(yàn)貓的生殖器官，稱得睪丸、附睪、卵巢與子宮的重量，并測(cè)量睪丸和卵巢大小。4％多聚甲醛固定睪丸、附睪、卵巢、子宮等組織，采用常規(guī)石蠟切片，厚度為5μm，蘇木精-伊紅（HE）染色，光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察并拍照，并用Motic Image

5、Plus2.0軟件進(jìn)行分析，測(cè)定100倍鏡下附睪管與40倍鏡下子宮腺體的數(shù)量、子宮粘膜厚度、曲精小管與附睪管的大小。
　　結(jié)果表明：免疫后，免疫組雄貓和雌貓的體重分別與對(duì)照組相比均沒(méi)有差異（P>0.05）；免疫組雄貓或雌貓的GnRH-I抗體水平均高于對(duì)照組（P<0.05）；免疫組雄貓血清睪酮水平，睪丸重量、橫徑、縱徑、橫周長(zhǎng)、縱周長(zhǎng)，附睪重量，附睪管的數(shù)量、縱徑、橫徑、周長(zhǎng)、面積顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；免疫組雌貓的血清雌二

6、醇濃度，卵巢重量、橫徑、縱徑、橫周長(zhǎng)、縱周長(zhǎng)均顯著低于對(duì)照組（P<0.05），但免疫組雌貓的子宮重量、子宮腺體數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度與對(duì)照組相比沒(méi)有差異（P>0.05）。組織切片顯示：免疫組雄貓睪丸的曲精小管發(fā)生萎縮，精原細(xì)胞分化不明顯；而對(duì)照組曲精小管內(nèi)細(xì)胞層數(shù)增多，精原細(xì)胞逐漸向管腔內(nèi)發(fā)育，分化為初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子。免疫組雄貓附睪未發(fā)現(xiàn)精子，附睪管腔變小，靜纖毛變短；而對(duì)照組附睪管中有精子存在，附睪黏膜上皮正常。免

7、疫組雌貓的卵巢卵泡未見(jiàn)明顯生長(zhǎng)發(fā)育，含有大量的原始卵泡和初級(jí)卵泡，未見(jiàn)次級(jí)卵泡；而對(duì)照組卵巢皮質(zhì)可見(jiàn)大量的原始卵泡、初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡。免疫組雌貓子宮內(nèi)膜上皮沒(méi)有變化，腺體正常，各層結(jié)構(gòu)清晰，與對(duì)照組沒(méi)有差異。
　　根據(jù)以上結(jié)果可以得出結(jié)論：MBP-GnRH-I6主動(dòng)免疫不影響貓的體重，能升高GnRH-I抗體水平，降低血清睪酮和雌二醇濃度，抑制精子發(fā)生與卵泡發(fā)育，使睪丸、附睪與卵巢萎縮。這表明MBP-GnRH-I6對(duì)貓有很強(qiáng)的免疫