主動免疫重組綿羊β2-腎上腺素受體對大鼠生長及血清生化指標(biāo)的影響.pdf

1、本研究包括2個試驗，用于研究主動免疫重組綿羊β2-腎上腺素能受體（β2-adrenoceptor，β2-AR）第二細(xì)胞外環(huán)融合蛋白對大鼠生長性能、屠宰和內(nèi)臟指標(biāo)、血清生化指標(biāo)的影響。主要研究工作如下：
　　 重組綿羊β2-AR的表達(dá)、純化與鑒定本試驗對不同誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)劑IPTG終濃度、培養(yǎng)溫度和振蕩培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)速等4個誘導(dǎo)培養(yǎng)條件對綿羊β2-AR第二細(xì)胞外環(huán)重組質(zhì)粒pET32C-AR/Se在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)水平的影

2、響進(jìn)行了研究，以篩選其最佳培養(yǎng)條件。利用Ni-IDA柱層析以及鹽酸胍梯度透析對目標(biāo)蛋白進(jìn)行純化，采用SDS-PAGE和western blotting 對目的蛋白進(jìn)行了鑒定。研究結(jié)果表明，隨著IPTG誘導(dǎo)時間的延長，重組綿羊β2-AR第二細(xì)胞外環(huán)的相對表達(dá)量逐漸增加，在2 h時相對表達(dá)量達(dá)到最大值，為菌體總蛋白的30.1%。IPTG終濃度在0.01~2 mmol/L之間時，重組綿羊β2-AR第二細(xì)胞外環(huán)的相對表達(dá)量水平均在27~30%左

3、右；當(dāng)IPTG終濃度為0.01 mmol/L時重組綿羊β2-AR第二細(xì)胞外環(huán)的相對表達(dá)量最高，占菌體總蛋白的30.5%。在設(shè)置的4個誘導(dǎo)溫度中，25℃時重組綿羊β2-AR第二細(xì)胞外環(huán)的相對表達(dá)量最高，占菌體總蛋白的35.5%。在振蕩培養(yǎng)箱不同轉(zhuǎn)速條件下，重組綿羊β2-AR第二細(xì)胞外環(huán)的相對表達(dá)量在33~40%之間波動；在200 rpm時，相對表達(dá)水平最高，為細(xì)菌總蛋白的40.0%。通過SDS-PAGE和western blotting鑒

4、定發(fā)現(xiàn)分子量大約在26 kD左右。綿羊β2-AR第二細(xì)胞外環(huán)基因在大腸桿菌中的表達(dá)最佳條件為：重組菌株在LB液體培養(yǎng)基中生長至OD600 0.5左右時，加入IPTG至終濃度0.01 mmol/L，于25℃、200 rpm誘導(dǎo)120 min。
　　 主動免疫重組綿羊β2-AR對大鼠生長及血清生化指標(biāo)的影響選用175 g左右的wistar雌性大鼠45只，隨機分為3組，分別對照組、免疫組和激動劑組。對照組和免疫組分別免疫佐劑和重組綿羊

5、β2-AR，在試驗開始后第二周初次免疫和第四周進(jìn)行加強免疫；激動劑組從試驗開始第三周添加鹽酸克倫特羅（3 mg/kg）。所有組在第六周后采血并屠宰，測定屠宰和內(nèi)臟指標(biāo)及血清生化指標(biāo)。結(jié)果表明：主動免疫重組綿羊β2-AR對大鼠體重和采食量均沒有顯著影響；與對照組相比，免疫組大鼠肝臟和肺重分別增加13.83%（P<0.05）和18.46%（P<0.05）；腹脂重量有減少的趨勢，比對照組減少了12.20%（P=0.11）。主動免疫重組綿羊β2