β3腎上腺素受體對(duì)大鼠心臟結(jié)構(gòu)的影響及可能的機(jī)制.pdf

1、目的：
　　1.采用大鼠心臟冠脈結(jié)扎術(shù)制備心衰模型，觀察心臟的β3-AR對(duì)心肌結(jié)構(gòu)的影響。
　　2.檢測(cè)SR59230A對(duì)大鼠心臟MicroRNAs表達(dá)的影響，探討β3-AR對(duì)心臟MicroRNAs表達(dá)的可能作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.心衰動(dòng)物模型的制備：將100只Sprague-Dawley（SD）大鼠（180-230g）隨機(jī)分為偽手術(shù)組（40只）和手術(shù)組（60只），手術(shù)組結(jié)扎心臟冠脈左前降支制備心衰模型，

2、偽手術(shù)組實(shí)驗(yàn)大鼠心臟只穿線(xiàn)不結(jié)扎。術(shù)前記錄正常心電圖，術(shù)中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)心電圖變化，術(shù)后八周對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠心臟做超聲心動(dòng)檢測(cè)，測(cè)定左心室收縮末期內(nèi)徑（LVIDS），左心室舒張末期內(nèi)徑（LVIDD），射血分?jǐn)?shù)（EF）和左心室短軸縮短率（％FS），確定心衰手術(shù)成功的大鼠為心衰組。
　　2.動(dòng)物分組：將偽手術(shù)組大鼠隨機(jī)分為兩組，偽手術(shù)組（Sham control group， Sham組）和偽手術(shù)＋SR59230A組（Sham+SR group，

3、Sham+SR組）。心衰組大鼠也隨機(jī)分為兩組：心衰組（CHF control group，CHF組）和心衰＋SR59230A組（CHF+SR group，CHF+SR組）。
　　3.阻斷β3-AR對(duì)大鼠心臟MicroRNAs表達(dá)的影響：Sham+SR組和 CHF+SR組大鼠腹腔注射1ml SR59230A（濃度85mmol/l），Sham組和CHF組大鼠腹腔注射等量生理鹽水，每天兩次，連續(xù)注射7周后提取各組大鼠心臟RNA，采用Na

4、noDrop2000C檢測(cè)RNA的濃度與質(zhì)量，通過(guò)microarray方法檢測(cè)β3-AR對(duì)大鼠心臟MicroRNAs表達(dá)的影響。
　　4.心臟結(jié)構(gòu)的改變和可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑：取各組大鼠左室心肌組織于10%的福爾馬林溶液中固定，然后進(jìn)行石蠟包埋，組織切片，通過(guò)H&E染色觀察心臟結(jié)構(gòu)和心肌細(xì)胞形態(tài)變化，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)心肌β3-AR、NF-κB p65和p53等相關(guān)蛋白的表達(dá)；同時(shí)取各組大鼠心臟冠脈結(jié)扎線(xiàn)下心肌組織做Western

5、Blot檢測(cè)，定量分析各組心肌組織β3-AR、NF-κB p65、p53和p53-Phospho-Serine15等蛋白的表達(dá)，以確定β3-AR改變心臟結(jié)構(gòu)和功能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。
　　結(jié)果：
　　1.超聲心動(dòng)檢測(cè)結(jié)果：采用超高分辨率小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像系統(tǒng)測(cè)定Sham組和CHF組大鼠的LVIDD、LVIDS及EF，并計(jì)算FS值，結(jié)果顯示模型成功的心衰組（CHF）大鼠的心功能較偽手術(shù)組（Sham）明顯下降。與Sham組比較，CH

6、F組LVIDD及LVIDS明顯增大（P<0.05，P<0.05），LVEF及%FS則明顯降低（P<0.01， P<0.01），證明模型成功。
　　2. SR59230A對(duì)大鼠心臟MicroRNAs表達(dá)的影響：microRNA microarray分析結(jié)果顯示大鼠在體給予SR59230A后，Sham組與CHF組有18種MicroRNAs共同表達(dá)下調(diào)，其中miR-125b-5p，miR-143-3p，miR-145-5p，miR-26

7、a-5p，miR-30a-5p和miR-320-5p與NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。
　　3. H&E染色觀察各組心肌組織病理學(xué)改變：在Sham組，心肌組織完好，未見(jiàn)損傷，心肌細(xì)胞排列整齊，核染色清晰；而在CHF組，心肌組織大面積皺縮，心肌纖維腫脹，斷裂，間質(zhì)水腫。此外，心肌細(xì)胞排列紊亂，松散，經(jīng)SR59230A在體處理后，CHF組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂減輕，心肌纖維斷裂減輕，炎性細(xì)胞減少，炎癥有逆轉(zhuǎn)趨勢(shì)。
　　4.免疫組化結(jié)果：鏡

8、下可見(jiàn)CHF組大鼠心臟β3-AR較Sham組表達(dá)增加（P<0.01），NF-κB p65在胞核與胞質(zhì)均有表達(dá)，在Sham組均未見(jiàn)明顯表達(dá)；CHF組p53在胞核表達(dá)多于胞質(zhì)。免疫組化評(píng)分結(jié)果顯示，CHF組NF-κB p65，p53表達(dá)較Sham組增加（P<0.01，P<0.01）；在體給予SR59230A后，CHF組NF-κB p65， p53表達(dá)下降（P<0.05，P<0.05），而Sham組NF-κB p65，p53表達(dá)增加（P<0.

9、01， P<0.01）。
　　5. Western Blot結(jié)果：CHF組β3-AR，NF-κB p65，p53-Phospho-Serine15蛋白表達(dá)明顯高于Sham組（P<0.05，P<0.05，P<0.05），CHF組p53蛋白表達(dá)也高于Sham組，但沒(méi)有顯著性差異。在體給予SR59230A后，CHF組大鼠心臟NF-κB p65和p53-Phospho-Serine15蛋白表達(dá)下降(P<0.05， P<0.01），但仍高于

10、 Sham組（P<0.05，P<0.05），而CHF+SR組與CHF組相比，p53蛋白表達(dá)沒(méi)有顯著性差異。Sham組大鼠在體給予SR59230A后，NF-κB p65，p53和p53-Phospho-Serine15蛋白表達(dá)均顯著增加（P<0.05，P<0.05，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.在體阻斷β3-AR后，可緩解心衰大鼠心臟異常的形態(tài)結(jié)構(gòu)和炎癥傾向，提示β3-AR表達(dá)增加與心臟的損傷有關(guān)。
　　2.給予

11、 SR59230A可引起大鼠心臟 MicroRNAs表達(dá)發(fā)生變化，其中miR-125b-5p，miR-143-3p，miR-145a-5p，miR-26a-5p，miR-30a-5p和miR-320-5p與NF-κB信號(hào)途徑有關(guān)。
　　3.心衰大鼠心臟β3-AR，NF-κB p65和p53-Phospho-Serine15表達(dá)增加，用SR59230A阻斷β3-AR可以降低心衰大鼠心臟NF-κB p65和p53-Phospho-Se