β3腎上腺素受體對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈張力及microRNAs表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　1.通過離體血管灌流檢測(cè)大鼠胸主動(dòng)脈β3腎上腺素受體（β3-AR）的作用及機(jī)制，并研究慢性心力衰竭（CHF）發(fā)展過程中β3-AR在胸主動(dòng)脈平滑肌中的表達(dá)及作用。
　　2.β3-AR阻滯劑SR59230A在體給藥5周后，觀察抑制β3-AR對(duì)假手術(shù)及CHF大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮功能、血管收縮反應(yīng)、microRNAs（miRNAs）表達(dá)及NF-κB表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1.將200只Sprague Daw

2、ley（SD）大鼠（體重180-220g）隨機(jī)分成假手術(shù)組（70只）和手術(shù)組（130只），結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支造成慢性心衰模型。術(shù)前記錄正常心電圖，術(shù)中持續(xù)監(jiān)測(cè)心電圖。手術(shù)完成后連續(xù)3天腹腔注射青霉素20萬單位，預(yù)防感染。
　　2.離體實(shí)驗(yàn)在手術(shù)四周后進(jìn)行，經(jīng)超聲心動(dòng)圖檢測(cè)選擇模型成功的大鼠，隨后取假手術(shù)組及手術(shù)組大鼠進(jìn)行離體血管灌流，觀察β3-AR激動(dòng)劑BRL37344（BRL）對(duì)血管的舒縮作用，并在預(yù)孵 L-NAME（NOS阻

3、斷劑）、H-89（PKA抑制劑）的情況下給予B R L研究β3-AR的相關(guān)作用機(jī)制；通過免疫組織化學(xué)法在形態(tài)學(xué)上觀察β3-AR在假手術(shù)和C HF組大鼠胸主動(dòng)脈的表達(dá)。
　　3.選擇β3-AR特異性阻斷劑SR59230A（SR）腹腔注射觀察β3-AR對(duì)血管功能的影響。大鼠手術(shù)后一周再行分為4組，假手術(shù)對(duì)照組（Sham control）、假手術(shù)+SR組（Sham+SR）、CHF對(duì)照組（CHF control）和CHF+SR組，每組10

4、只，對(duì)照組腹腔注射0.9％生理鹽水1mL，SR組腹腔注射SR，85 nmol溶于1 mL0.9%生理鹽水，2次/天。給藥五周后，觀察離體血管環(huán)對(duì)乙酰膽堿（Acetylcholine,Ach）的舒張反應(yīng)及對(duì)去甲腎上腺素（Noradrenaline bitartrate， N A）的收縮反應(yīng)，以檢測(cè)內(nèi)皮功能及血管收縮反應(yīng)；通過H&E染色觀察四組大鼠胸主動(dòng)脈組織結(jié)構(gòu)；通過熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)SR對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈miRN As表達(dá)的影響；通過免

5、疫組織化學(xué)法及Western blot檢測(cè)NF-κB在各實(shí)驗(yàn)組大鼠胸主動(dòng)脈的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.在30 mmol/LKCl預(yù)收縮下，β3-AR激動(dòng)劑BRL可以誘導(dǎo)Sham組大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的血管舒張效應(yīng)，對(duì)內(nèi)皮完整血管環(huán)的舒張效應(yīng)大于其對(duì)平滑肌誘導(dǎo)的舒張效應(yīng)（P＜0.05）；該舒張效應(yīng)可被β3-AR阻斷劑SR所抑制（P＜0.01），也可被L-NAME部分抑制（P＜0.01），但不受β1、β2-AR抑制劑Propra

6、nolol（Pra）的影響。BRL在 CHF大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌誘導(dǎo)的血管舒張效應(yīng)大于其在 Sham組大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌誘導(dǎo)的舒張效應(yīng)（P＜0.01）。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，β3-AR在血管平滑肌層和內(nèi)皮細(xì)胞層均有分布，且心衰時(shí)胸主動(dòng)脈平滑肌層β3-AR表達(dá)增加。
　　2. SR腹腔注射五周后，與 Sham control組相比，Sham+SR組顯示較低的Ach內(nèi)皮依賴性舒張效應(yīng)，CHF control組大鼠胸主動(dòng)脈的Ach內(nèi)皮依賴

7、性舒張效應(yīng)明顯減??；與CHF control組相比，CHF+SR組大鼠Ach誘導(dǎo)的血管舒張效應(yīng)有增加趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；H&E染色顯示心衰大鼠給予SR腹腔注射后血管形態(tài)紊亂現(xiàn)象逆轉(zhuǎn)，與功能學(xué)結(jié)果相一致。此外，與control組相比，SR組大鼠胸主動(dòng)脈在NA（10-8-10-5 mol/L）預(yù)刺激下表現(xiàn)為收縮反應(yīng)增強(qiáng)。
　　3.miScript microRNAPCR結(jié)果顯示，與Sham control組相比，Sham+SR組有4

8、8個(gè)miRN As表達(dá)改變；與C HF co ntro l組相比，CHF+S R組大鼠胸主動(dòng)脈有42個(gè) miRNAs發(fā)生變化；其中這兩組共同上調(diào)的 miRNAs有9個(gè)，分別是rno-miR-142-3p、rno-miR-144-3p、rno-miR-146a-5p、rno-miR-223-3p、rno-miR-224-5p、rno-miR-342-3p、rno-miR-451-5p、rno-miR-497-5p、rno-miR-92a-

9、3p，共同下調(diào)的有16個(gè)，分別是rno-let-7b-e-5p、rno-miR-103/107-3p、rno-miR-130a-3p、rno-miR-181b-5p、rno-miR-185-5p、rno-miR-183-5p、rno-miR-214-3p、rno-miR-320-3p、rno-miR-352、rno-miR-494-3p、rno-miR-93-5p、rno-miR-99a-5p。經(jīng)文獻(xiàn)比對(duì)，25個(gè)與β3-AR有關(guān)的miR

10、N As中19個(gè)與NF-κB通路有關(guān)。其中rno-let-7c-5p及rno-miR-451-5p在Sham+SR組及CHF+SR組的變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.免疫組化結(jié)果表明 NF-κB在 Sham+SR組大鼠胸主動(dòng)脈的表達(dá)稍高于Sham control組，在CHFcontrol組中表達(dá)最多，心衰大鼠給予SR腹腔注射后NF-κB的表達(dá)有所下降，Western blot結(jié)果也顯示SR腹腔注射可使CHF大鼠胸主動(dòng)脈NF-κB的表

11、達(dá)量下降。
　　結(jié)論：
　　1.β3-AR在大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮層和平滑肌層均有分布，激動(dòng)β3-AR可誘導(dǎo)胸主動(dòng)脈舒張效應(yīng)，且該效應(yīng)與N O S通路有關(guān)；心衰大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌層β3-AR的表達(dá)上調(diào)，其誘導(dǎo)的平滑肌舒張效應(yīng)增強(qiáng)。在體抑制β3-AR后，大鼠胸主動(dòng)脈收縮反應(yīng)增強(qiáng)。
　　2. SR在體給藥后假手術(shù)大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮功能受損；心衰大鼠胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)異常，內(nèi)皮功能受損，體內(nèi)注射SR阻斷β3-AR后可減緩由心衰引起的