Marimastat抑制翼狀胬肉纖維組織增生的研究探討.pdf

1、目的：翼狀胬肉是局部球結(jié)膜及其下纖維血管組織呈三角形膜樣增生而侵犯角膜的一種慢性眼表疾病，是眼科常見病、多發(fā)病。多發(fā)生于雙眼，占據(jù)鼻側(cè)結(jié)膜。治療胬肉的方法很多，目前為止，治療方法仍以手術(shù)為主。單純胬肉切除，術(shù)后復(fù)發(fā)率高達(dá)24％-89％。所以尋求各種切實(shí)可行的治療措施，以減少及控制翼狀胬肉的復(fù)發(fā)一直是眼科臨床研究的重要內(nèi)容。已有多個(gè)研究證實(shí)，血管纖維組織增生是翼狀胬肉的主要病理改變。細(xì)胞凋亡，氧化應(yīng)激，免疫反應(yīng)，角膜緣干細(xì)胞缺失，基質(zhì)金屬

2、蛋白酶表達(dá)異常等因素均與翼狀胬肉的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteases，MMPs）是一類由結(jié)締組織合成、分泌并依賴鋅的肽鏈內(nèi)切酶。主要作用是降解膠原，已有研究證實(shí)，基質(zhì)金屬蛋白酶M M P s與翼狀胬肉的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系，有多種MMPs在翼狀胬肉體部及翼狀胬肉頭部成纖維細(xì)胞中表達(dá)增強(qiáng)，這可能是其侵蝕溶解角膜前彈力層及向角膜侵犯進(jìn)展的主要原因。本研究用特異性的M MP s抑制藥物Marim

3、asta作用于人翼狀胬肉成纖維細(xì)胞（HPF）體外傳代培養(yǎng)模型，初步探討Marimasta對(duì)人翼狀胬肉成纖維細(xì)胞（HPF）增殖的影響及其可能的機(jī)制，意在尋找治療翼狀胬肉的一種較理想的藥物。
　　 方法：（1）采用切除的翼狀胬肉組織進(jìn)行體外成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，將傳代的第3代人翼狀胬肉成纖維細(xì)胞與不同濃度的Marimasta（5ng/ml～20ng/ml）分別處理48 h，并設(shè)對(duì)照組，通過噻唑蘭比色法（MTT法），在酶聯(lián)免疫測(cè)定儀上測(cè)49

4、0nm處吸光值，計(jì)算出在不同濃度Marimasta條件下的凈增抑制率；（2）采用切除的原發(fā)性翼狀胬肉頭部組織進(jìn)行體外成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng)，將傳代的第3代人翼狀胬肉成纖維細(xì)胞分別被不同濃度的Marimasta（5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml）處理48 h，并設(shè)置不加藥物的對(duì)照組培養(yǎng)48小時(shí)，倒置顯微鏡下分別觀察濃度為5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml的Marimasta作用于翼狀胬肉成

5、纖維細(xì)胞后的細(xì)胞生長狀態(tài)；（3）用20ng/ml的Marimasta作用于第三代成纖維細(xì)胞，并設(shè)置對(duì)照組，分別培養(yǎng)48小時(shí)，收集對(duì)照組翼狀胬肉成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的上清液及Marimasta作用48h后翼狀胬肉成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的上清液，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中：MMP-1，MMP-3的含量。
　　 結(jié)果：MMT結(jié)果顯示Marimasta對(duì)體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞增生有明顯的抑制作用，這種抑制作用呈劑量依賴型。當(dāng)Marimasta濃度

6、為20ng/ml時(shí)，其細(xì)胞增殖抑制率可高達(dá)83.22％左右。倒置顯微鏡下觀察各濃度組Marimasta作用于體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)有明顯的變化，細(xì)胞脫壁，胞體收縮、變圓，甚至崩解，隨藥物濃度增加，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則明顯，這種形態(tài)學(xué)改變呈劑量依賴型。當(dāng)Marimasta濃度為20ng/ml時(shí)，其細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯的固縮，鏡下很少見到正?；钚约?xì)胞。培養(yǎng)的初發(fā)翼狀胬肉成纖維細(xì)胞上清中，加入20ng/ml Marimasta作用48h后和不

7、加藥的對(duì)照組比較MMP-1，MMP-3含量明顯下降。
　　 結(jié)論：用不同濃度組的marimastat作用于體外培養(yǎng)的人翼狀胬肉成纖維細(xì)胞中，我們從細(xì)胞形態(tài)學(xué)、MTT法兩種公認(rèn)的研究方法均可以證實(shí)翼狀胬肉體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞的質(zhì)和量得到了明顯的抑制，本研究范圍內(nèi)，marimastat對(duì)體外培養(yǎng)的翼狀胬肉成纖維細(xì)胞的抑制作用在一定范圍內(nèi)隨藥物濃度增大，抑制作用越明顯。提示marimastat通過抑制翼狀胬肉基質(zhì)金屬蛋白酶的過度表達(dá)而

8、達(dá)到了抑制翼狀胬肉纖維組織增生的目的，marimastat有可能成為新型防治翼狀胬肉藥物，但尚須進(jìn)一步研究和確認(rèn)其作用機(jī)制。又因?yàn)樗幬镒饔迷隗w內(nèi)外有一定差異，在全身與局部有一定的差異，我們擬進(jìn)一步觀察和研究marimastat對(duì)動(dòng)物活體眼藥效及毒性反應(yīng)，以確定有效無毒的治療濃度和最佳給藥途徑。marimastat有抗增殖作用，是否可用于術(shù)前抗炎及術(shù)后急性炎癥防治，是否可用于翼狀胬肉治療的整個(gè)過程，需進(jìn)一步研究。marimastat可望成